Что такое витрификация воды
Меню сайта
Рост и развитие растений.
Витрификация— это переход свободной воды в клетках растения в стеклообразное состояние при резком охлаждении растений ниже 20 градусов
мороза. Застывшая растительная ткань в виде аморфной стекловидной массы долго сохраняет свою жизнеспособность. Условия разморожения витрифицированных растений определяют возможность восстановления жизнеспособности: Подарочные сертификаты в спа салон купить в спб подарочный сертификат спа спб.
при медленном отогревании ткани восстанавливаются,
при быстром отогревании происходит гибель клеток из-за того, что вода в большом количестве, поступающая в протопласт, не успевает перейти в связанное с белками состояние и повреждает структуры ядра и цитоплазмы.
И.И. Туманов в 60-е годы прошлого века обосновал теорию закаливания растений, согласно которой при закаливании в тканях растений физиологические процессы идут с клетках в следующем порядке:
на первой фазе закаливания происходит накапливание сахаров, снижается осмотическое давление под влиянием низких положительных температур, прекращается рост растения,
Закаливанию растений способствует накопление ингибиторов роста, а ослабляет процесс закаливания увеличение концентрации гиббереллинов.
Устойчивость к заморозкам у сельскохозяйственных культур различна.
Сельскохозяйственные культуры
температурный предел, который они выдерживают в фазе всходов
горох, капуста, овес, пшеница, ячмень
бобы, морковь, подсолнечник, свекла
картофель, кукуруза, махорка
арахис, бахчевые, гречиха, огурец, табак, томат, фасоль
В практикесельского хозяйства применяют следующие приемы повышения холодостойкостирастений:
закалканабухших семян в течение 5-10 дней попеременно температурами выше и ниже 0оС,
намачиваниесемян теплолюбивых культур (кукурузы) в растворе алюмокалиевых квасцов,
замачиваниесемян в растворах микроэлементов, азотнокислого аммония
в теплицах и парниках низкими положительными температурами (открывание рам, поднятие «фартуков» в пленочных теплицах днем).
при выращивании южных плодовых культур в северных районах достигают путем искусственного сокращения длины дня
, при этом укорачивается период вегетации и создаются условия для вызревания древесины, полного ухода в состояние покоя почек, а, следовательно, обеспечивается успешная перезимовка.
Рекомендуем к прочтению:
Что такое витрификация воды
Или как выбрать идеальные соломинки для своей клиники
Что такое витрификация?
Витрификация – это метод криоконсервации живых объектов, при котором в охлаждаемых клетках и окружающем растворе не допускается кристаллизация воды. В конце 20-го века этот метод ещё называли «сверхбыстрое замораживание», ведь клетки охлаждаются до температуры жидкого азота практически мгновенно. Чтобы быстро охладить эмбрион, необходимо уменьшить объём среды в который он погружён. Для этого используют специальные носители для витрификации. Для защиты от негативного воздействия заморозки эмбрионы проводят по растворам криопротекторов.
Как устроен носитель?
Носителем называют устройство, в которое помещают эмбрион для криоконсервации. Носитель может быть открытым – в этом случае капля криопротекторного раствора с эмбрионом непосредственно контактирует с жидким азотом; либо закрытым – в этом случае криопротекторный раствор не контактирует с жидким азотом и охлаждение происходит через стенку защитного чехла. Как у открытого, так и у закрытого носителя имеется защитный чехол, который предотвращает механическое повреждение замороженного эмбриона. В большинстве случаев, носители для витрификации эмбрионов изготовлены из различных полимерных материалов (поликарбонат, полипропилен и пр.) и имеют вытянутую форму.
Первые носители для витрификации эмбрионов представляли собой полипропиленовые соломинки, которые полностью заполняли криопротекторным раствором и закупоривали с двух концов. Современные носители внешне напоминают своих предшественников, поэтому их по привычке также называют соломинками.
Сегодня на рынке представлено большое количество удобных и безопасных крионосителей для витрификафии эмбрионов. Наиболее распространенные из них мы рассмотрим подробнее.
Открытые носители
Как уже говорилось выше, при использовании открытых носителей эмбрион непосредственно контактирует с жидким азотом, что обеспечивает высокую скорость замораживания.
Открытый носитель состоит из двух частей: собственно носителя для эмбриона и защитного чехла. Носитель имеет толстую пластиковую ручку, за которую его удобно держать и тонкую лопатку, куда необходимо поместить эмбрион в капле «среды для заморозки». Чехол надевается на носитель, чтобы защитить эмбрион. Часто в чехле есть утяжелитель, чтобы соломинка не всплывала в жидком азоте.
CryoTEC (Cryotech, Япония)
Носитель устроен по общему принципу: собственно носитель в виде рукояти с тонким лепестком и чехол с металлическим утяжелителем.
Носитель имеет удобную ручку: она достаточно объемна, ее удобно держать в руке, на ней много места для записи идентификационных данных пациента, четырёхгранная форма не позволяет ей катиться по столу. На одну из граней нанесена надпись CRYOTEC, ориентируясь на неё вы всегда будете знать с какой стороны находится эмбрион. Ручка выполнена из красивого прозрачного пластика и представлена в разных цветах, что облегчает поиск нужной соломинки в криохранилище.
Лепесток, на который помещается эмбрион выполнен из тонкой пленки и качественно припаян к ручке носителя. Он широкий и на него удобно помещать эмбрионы. На конце лепестка есть визуальная метка, которая позволяет лучше видеть кончик соломинки под слоем жидкого азота и облегчает надевание чехла.
Чехол выполнен из пластика и также имеет визуальную метку на конце. Существует 2 варианта чехлов – старый и новый. В более раннем варианте чехла в качестве утяжелителей использовались 2 металлических шарика. При размораживании они иногда выстреливали и отвлекали громким хлопком, тк между ними скапливались пары азота. В чехле нового типа недостаток устранён, благодаря использованию монолитного утяжелителя.
Простая, удобная система, есть различные цветовые варианты чехла, есть место для записи данных пациента.
В жидком азоте чехол становится хрупким, и его можно повредить даже при удерживании/захвате пинцетом. Если чехол повредился в месте, где расположен замок, он может соскользнуть с соломинки при подъеме носителя для идентификации пациента.
CryoTOP (Kitazato, Япония)
Cryotop состоит из носителя с тонким лепестком и чехла с утяжелителем. Ручки носителя выполнены из непрозрачного пластика разных цветов, что удобно при поиске соломинки в криохранилище.
Основное отличие от Cryotec – меньшая ширина носителя. С одной стороны, это достоинство, так как узкие соломинки занимают меньше места в криохранилище; с другой – тонкая соломинка не очень удобно лежит в руке, на ней меньше места для записи данных пациента. Хотя, для опытного эмбриолога это не будет проблемой.
Лепесток, на который помещается эмбрион, также выполнен из тонкой плёнки и имеет визуальную метку на конце, однако, он более узкий. Рабочая поверхность не гладкая, как у CryoTEC, а шершавая.
Это различие не влияет на качество витрификации, но ощущается в работе: различается распределение жидкости, ее текучесть, динамика движения самих объектов на этих двух носителях. С более широкого лепестка CryoTEC отбирать жидкость удобнее, чем с более узкого CryoTOP.
Чехол более тонкий и узкий, чем у CryoTEC. Он выполнен из пластика и имеет визуальную метку на конце. В качестве утяжелителя использован полый цилиндр, благодаря этому пары азота свободно проходят через него и не могут его вытолкнуть.
Простая, удобная система, есть различные цветовые варианты чехла, есть место для записи данных пациента.
Как и у CryoTEC, чехол может становиться хрупким в жидком азоте.
VitriFit (Origio, США)
Vitrifit необычен тем, что полностью выполнен из одного материала, однако имеет все классические элементы: рукоять с площадкой для размещения эмбриона и чехол. Этому носителю не нужны никакие утяжелители, так как его материал обладает отрицательной плавучестью, и любая часть сама по себе тонет в жидком азоте.
Рукоять достаточно широкая, её удобно держать в руке, а шестигранная форма носителя позволяет укладывать соломинки в гоблеты наиболее компактным способом. На ручке есть специальная площадка для записи идентификационных данных пациента и маркировка для того, чтобы знать с какой стороны находится эмбрион. На рынке представлено 4 цветовых варианта носителя.
Площадка для размещения эмбриона представляет собой не мягкий лепесток из пленки, а твёрдую изогнутую лопатку. Радиус изгиба большой и при работе ничем не отличается от полностью ровных площадок. На кончике гладкой лопатки есть визуальная метка в виде шершавой части. Чехол имеет шестигранную форму и окрашен, также как и ручка. Благодаря специальному материалу он тонет без утяжелителей.
Тонет в жидком азоте, кончик носителя не колеблется и не прогибается.
Данный носитель появился недавно и отзывов о нем мало.
McGill CryoLeaf (Origio, США)
CryoLeaf, как и большинство открытых систем, включает в себя рукоятку с лопаткой для размещения эмбриона и защитный чехол. Кроме этого, на самом носителе есть передвижной щиток для дополнительной защиты эмбриона.
Рукоятка выполнена из непрозрачного белого полипропилена, она широкая и удобно лежит в руке, на ней достаточно места для записи данных пациента. Однако, из-за своей ширины носитель занимает много места в криохранилище.
Рабочая часть представлена ровной прозрачной лопаткой комфортной ширины. Визуальной метки на конце, к сожалению, нет.
Защитный щиток отличается по цвету от остальных деталей носителя. Перед тем, как поместить эмбрион на лопатку, необходимо отодвинуть щиток в сторону, затем погрузить соломинку в жидкий азот, и после этого под жидким азотом с помощью пинцета надвинуть чехол обратно (на лопатку с эмбрионом) и повернуть вокруг носителя, таким образом зафиксировав его. После этого поверх конструкции надевается еще один привычный эмбриологам чехол.
Защитный чехол не имеет утяжелителей. На конце есть визуальная метка, которая помогает увидеть границы чехла под жидким азотом. Существует несколько цветовых вариантов метки, что помогает при поиске соломинки в криохранилище, хотя, полностью цветная ручка, несомненно удобнее.
Широкая ручка, удобно наносить надписи.
Массивный, занимает много места в криохранилище. При разморозке щиток иногда примёрзает к носителю и его сложно снимать.
CryoLogic (CryoLogic, Австралия)
CryoLogic состоит из чехла и носителя. Носитель полностью выполнен из цветного пластика, есть несколько вариантов цветов. Основная особенность этих соломинок в том, что эмбрион не соприкасается с носителем за счёт рабочей зоны нестандартной формы.
Капля с эмбрионом держится в ней за счёт поверхностного натяжения. Преимущество такой конструкции в том, что происходит непосредственное охлаждение капли с эмбрионом без предварительного охлаждения подложки в виде лепестка или лопатки. С другой стороны размер капли требуется больше, чем в соломинках с лепестком или лопаткой, и на охлаждение большой капли требуется дополнительное время.
За счёт того, что ручка достаточно узкая и чехол закрывает большую её часть, на ней не остаётся места для записи данных пациентов. Многие эмбриологи выходят из положения, записывая данные прямо на чехле, но это не лучшая практика, так как чехлы можно перепутать. В новой версии ручка стала шире, и на ней появилась специальная площадка для записи данных.
На ручке есть специальные «ушки» для фиксации чехла. Чехол плотно садится на носитель и не слетает. Однако за счёт большой длины и отсутствия утяжелителей, в нем скапливается воздух, и носитель с надетым чехлом начинает плавать на поверхности. Для того, чтобы избежать подобной ситуации, рекомендуется предварительно заполнять чехол жидким азотом. Визуальная метка на конце чехла отсутствует.
Быстрая скорость охлаждения эмбриона.
Нет утяжелителей в чехле (всплывает в жидком азоте), нет места для записи данных пациентов в варианте носителя с петлей, нет визуальной метки на краю чехла.
CryoLock (Irvine Scientific, USA)
Ручка, и чехол носителя имеют четырёхгранную форму и выполнены из цветного пластика, тонущего в жидком азоте. За счёт того, что сам материал обладает отрицательной плавучестью дополнительных утяжелителей не требуется. В общих чертах Cryolock схож с носителем VitriFit от Origio, но у него четырех, а не шестигранная ручка, нет визуальной метки на чехле, желобок для эмбрионов сделан более аккуратно.
Ручку удобно держать в руке, на ней предусмотрено место для записи данных пациентов. По выпуклой надписи Cryolock легко определить с какой стороны лежат эмбрионы, когда соломинка закрыта.
Рабочая зона выполнена в виде прозрачного желобка из того же материала, что и ручка. На конце желобка есть визуальная метка. Достоинство такой системы в том, что она не начинает вибрировать от неосторожного прикосновения, в отличие от носителя в виде тонкого лепестка.
Так как поверхность желобка не совсем плоская, специалисты советуют оставлять чуть больше среды, чтобы избежать залипания эмбрионов.
Простая, удобная система, тонет в жидком азоте, есть разные цвета, лепесток не вибрирует от неосторожного прикосновения.
Нет визуальной метки на краю чехла.
Отзывы специалистов
Константин Боярский, репродуктолог, Центр репродукции «Генезис» (Санкт-Петербург): «Наша команда использует среды Протеинсинтеза для криоконсервации морул давно. В группе пациенток с переносом размороженных эмбрионов мы достигаем частоты наступления беременности 48%. Наши результаты мы докладываем на научных конференциях и публикуем в научных журналах».
Ирина Михайлова, эмбриолог, Краевой клинический центр (Владивосток): «Я очень довольна растворами для витрификации ЗАО Протеинсинтез. Вначале, когда мы только открылись, были проблемы с криоконсервацией, но после приезда Романа Шафеи – он исправил некоторые моменты – беременности после крио стали стабильными и результаты очень хорошими. В криоциклах мы почти всегда имеем хорошие бластоцисты на перенос. Беременности наступают даже у очень возрастных пациенток! И частота наступления беременности выше, чем в свежих протоколах».
Ирина Федорова, эмбриолог, НИИ Акушерства, гинекологии и репродукции им. Д.О. Отта (Санкт-Петербург): «Мы используем наборы для витрификации ЗАО «Протеинсинтез» с открытия нашего отделения. Параллельно с их использованием опробуем большинство наборов для криоконсервации, появляющихся на российском рынке, но остаёмся верны нашему первоначальному выбору. Чем мне нравятся эти растворы: простотой и эргономичностью их использования. Это важный фактор не только для начинающих, но для эмбриологов с опытом, особенно при больших объемах работы. Я всем могу их рекомендовать, и я знаю, что многие мои коллеги в Питере их используют».
Антон Лякаев, эмбриолог, Медицинский центр «Папа, мама и малыш» (Нижний Новгород): « В феврале 2015 года нашу клинику посетил в качестве консультанта Роман Шафеи. Одной из его рекомендаций было применение сред для витрификации ЗАО «Протеинсинтез», а также применение открытых носителей, схемой изготовления которых Роман с нами любезно поделился. Среды оказались очень удобны в использовании, несмотря на более высокую вязкость в сравнении с импортными аналогами, но я к этому очень быстро привык. Кроме того, объем растворов достаточно большой, что увеличивает количество возможных процедур. Отмечу также большие сроки годности сред для витрификации, отлично поставленную логистику (доставляются очень быстро). Что же касается эффективности, то и тут я был приятно удивлен: частота наступления беременности составила около 50%, а выживаемость бластоцист после разморозки около 95%! Как итог: рекомендую всем!»
Наталья Макарова, эмбриолог, НЦ Акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова (Москва): «Мы проводили клинические испытания набора для витрификации бластоцист «B-VIT» производства ЗАО «Протеинсинтез». В качестве набора сравнения мы выбрали набор Cryotech, который сейчас считается самым эффективным для витрификации. Соломинки для обоих растворов использовали одинаковые – криотековские. Я относилась с некоторой настороженностью к отечественным средам, но результаты говорят сами за себя: на средах B-VIT хорошо разморозились 94% бластоцист, на Cryotech – 92%. Хотя к средам Протеинсинтеза надо привыкнуть, они более вязкие, но зато у них объем больше, и если работать в каплях, то получается очень выгодно».
Татьяна Кодылева, эмбриолог, НЦ Акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова (Москва): «Я хорошо знакома со средами, которые предлагает Протеинсинтез. Это был мой первый опыт работы с витрификационными средами, в то время я работала эмбриологом в медицинской компании ИДК, и мы долгое время использовали подобные среды, тогда они выпускались под другим брендом, результаты на них были очень хорошими. В прошлом году Росздравнадзор направил в наш центр на испытания набор Z-VIT для замораживания зигот и морул. Испытания проводили на 3PN-зиготах. Я знала этот набор и была уверена в результатах, что и подтвердилось: 100% выживаемость (53 зиготы). А мои коллеги были приятно удивлены, что на российском рынке есть качественные среды для криоконсервации эмбрионов».
Тамара Смирнова, эмбриолог, Центр репродукции «Генезис» (Санкт-Петербург): «Наш центр проводит витрификацию на различных средах. У нас большой и успешный опыт по витрификации на средах Протеинсинтез. Среды недорогие, поставляются быстро. Методике витрификации обучил сам автор – Роман Шафеи, и в любое время он дает бесценный совет по любому вопросу в эмбриологии. А самое главное, мы получили много беременностей и здоровых детей!»
Наталья Фирсова, эмбриолог, Клиника репродуктивного здоровья «Альянс Клиник» (Ульяновск): «В апреле 2016 года я впервые попробовала среды для витрификации ЗАО «Протеинсинтез». Не боюсь пробовать новинки, поскольку наука (в том числе российская) всегда имела достойные достижения на горизонте своей истории. Но доля скепсиса по отношению к российскому производителю, конечно, была, но это не тот случай! В 97% случаев эмбрионы хорошо переносят криоконсервацию. Частота наступления беременности увеличилась по сравнению с использованием других сред. Даже эмбрионы невысокого качества хорошо переносят заморозку и имеют хорошую динамику восстановления. Благодаря этому больше эмбрионов отбираем на заморозку. Более того, есть успешный опыт разморозки ооцитов на средах Z-REV. В общем, обязательно продолжим использовать эти наборы для витрификации и полностью перейдем только на них. Спасибо за качественный товар отечественного производства!»
Мария Богданова, эмбриолог, Клиника Санкт-Петербургского государственного университета (Санкт-Петербург): «Витрифицирую на наборах «Протеинсинтез» уже два года. Более простой и надежной системы для рутинной криоконсервации эмбрионов не знаю. Идеальный набор для того, чтобы начать витрифицировать, если вы этого еще никогда не делали. В качестве носителя можно использовать любой имеющийся, даже соломинки для медленной заморозки 0.25 мл. Отличный срок хранения. Всегда в наличии, никогда не подводили».
Юлия Формокидова, эмбриолог, Медицинский центр «Надежда» (Кемерово): «Мы пользуемся средами «Протеинсинтез» с 2014 года. В криоциклах получаем больший процент беременностей, жизнеспособность размороженных бластоцист составляет 95%. Хочется отметить простоту изготовления крионосителей и возможность экономичного использования сред. Очень благодарны Роману Шафеи не только за методики витрификации, хэтчинга, которым он нас обучил, но и за бесчисленное количество советов».
Алина Карпенко, эмбриолог, Медицинский центр «Эмбрио» (Краснодар): «Наш центр использует среды ЗАО «Протеинсинтез» для криоконсервации морул и бластоцист давно. Среды недорогие, доставка быстрая, объёмы большие. Технология использования удобна, результаты отличные, особенно, при разморозке морул. Всем эмбриологам рекомендую попробовать и оценить среды «Протеинсинтеза»».
Анисат Османова, репродуктолог, эмбриолог, Медицинский центр в Коломенском (Москва): «В настоящий момент в работе использую только наборы B-VIT и B-REV производства ЗАО «Протеинсинтез». По основным критериям оценки качества среды наборы демонстрируют высокие показатели. Так, частота выживаемости бластоцист в среде составляет 100%, частота наступления беременности сопоставима с криопротоколами с применением наборов Kitazato и Cryotech. Среды ЗАО «Протеинсинтез» удобно маркированы, имеют простой протокол работы, характеризуются длительными сроками годности и доступностью. Особенностью среды является высокая вязкость, однако данное качество только облегчает работу эмбриолога. Единственным отрицательным моментом является тот факт, что бластоциста длительно расправляется после оттаивания. В связи с чем, размораживаю эмбрионы за 3-4 часа до переноса. В целом, наборы производства ЗАО «Протеинсинтез» абсолютно конкурентоспособные продукты на рынке».
Наталья Кучукова, эмбриолог, Клиника лечения бесплодия «ЭКО» (Самара): «Пользуемся наборами для витрификации Z-VIT с 2014 года. Сначала эмбрионы хранили в соломинках CryoBioSystem0,25мл, запечатывая их специальным порошком. После появления носителей для открытой витрификации типа McGillCryoleaf (ORIGIO), Cryotop (Kitazato), Cryoloсk и т.д., решили попробовать на них. Это привело к более экономному расходованию сред и увеличению числа процедур замораживания на один набор. Из-за малого объема капли и быстрого охлаждения получили более высокую выживаемость эмбрионов. В общем, у этих наборов оптимальное сочетание цены и качества».
Анна Абраменко, эмбриолог, Отделение ВРТ Клиники №1 ВолгГМУ (Волгоград): «С наборами ЗАО «Протеинсинтез» мы работаем с 2015 года. Подкупает простота использования, экономичность, большие сроки хранения продукта и оперативная доставка. Выживаемость бластоцист после размораживания (витрификация набором В-VIT) свыше 98%. Также мы успешно используем наборы Z-REV для размораживания эмбрионов и бластоцист, витрифицированных ранее на средах других производителей. Приятно, что столь качественный продукт – отечественного производства».
Ольга Петрова, главный врач, Центр Репродукции Клиники Современной Медицины (Иваново): « Наш центр работает со средами для витрификации и размораживания бластоцист B-VIT/B-REV ЗАО «Протеинсинтез» с момента открытия в октябре 2015 года. Мы отмечаем:
— наступление беременности в криопереносах составляет 44%
— выживаемость зрелых бластоцист после разморозки близка к 100%
— методика проста и удобна в работе
— цена доступна, сроки годности большие
— быстро реагируют менеджеры, быстрая доставка
— существует непосредственный контакт с разработчиком сред по всем возникающим вопросам.
Мы довольны своим выбором и намерены и дальше работать с реактивами производства ЗАО «Протеинсинтез»
Вениамин Казаринов, эмбриолог, Центр новых медицинских технологий (Новосибирск): «С начала 2017 года пользуемся наборами для витрификации и оттаивания от “Протеинсинтез”, результаты хорошие, и сравнимы с зарубежными аналогами. Эффективность разморозки более 92%. Очень приятно, что Z-REV универсальная среда для разморозки, которая позволяет работать с эмбрионами, витрифицированными на средах других производителей, при этом качество разморозки остается высоким, эмбрионы сохраняют морфологические показатели и успешно дают беременности. Среды неприхотливы к условиям хранения, до вскрытия можно держать запас при комнатной температуре, не загромождая холодильник. Радует длительный срок годности сред и грамотная упаковка. Работать со средами можно в обычном 4х-луночном планшете, а объем используемой среды варьировать по необходимости. Доставка выше всяких похвал, за два дня в Сибирь заказ приезжает всегда. По всем вопросам производитель любезно и охотно отвечает».