Диализ что это биохимия

ДИАЛИЗ

ДИАЛИЗ (греч, dialysis разложение, отделение) — метод удаления низкомолекулярных веществ из растворов коллоидных и высокомолекулярных веществ, основанный на свойстве некоторых мембран пропускать низкомолекулярные вещества и ионы и задерживать коллоидные частицы и макромолекулы. Диализ широко применяется в экспериментальной и клинической медицине.

Жидкость, подвергаемую Диализу, отделяют от чистого растворителя соответствующей мембраной, через к-рую молекулы и ионы диффундируют в растворитель и при достаточно частой смене растворителя почти целиком удаляются из диализируемой жидкости. Явление Диализа было впервые описано Грэмом (Т. Graham) в 1862 г.

В качестве мембран для Д. применяют естественные перепонки (бычий или свиной пузырь, плавательный пузырь рыб) и искусственные пленки из нитроцеллюлозы, ацетилцеллюлозы, целлофана, купрофана, нефрофана и других материалов. Искусственные мембраны имеют преимущество перед естественными, т. к. их можно готовить с различной и хорошо воспроизводимой проницаемостью. При выборе материала для мембраны часто необходимо принимать во внимание заряд мембраны в том или ином растворителе, который возникает в результате диссоциации самого вещества мембраны или избирательной адсорбции на ней ионов, или неравномерного распределения ионов по обе стороны мембраны (см. Мембранное равновесие). Наличие заряда у мембраны иногда может служить причиной коагуляции (см.) при Д. коллоидных р-ров, частицы которых несут заряд, противоположный по знаку заряду мембраны.

Существует большое разнообразие приборов для проведения Д., называемых диализаторами. Все эти приборы построены по общему принципу: диализируемая жидкость («внутренняя жидкость») находится в сосуде, в к-ром она отделена от воды или другого растворителя («внешняя жидкость») мембраной, проницаемой для низкомолекулярных веществ и не проницаемой для коллоидных частиц и макромолекул. Скорость Д. возрастает с увеличением поверхности мембраны, с повышением температуры, при помешивании диализируемой жидкости и при увеличении разности концентраций низкомолекулярных веществ между внутренней и внешней жидкостями.

Диализатор Грэма (рис. 1) — стеклянный или пластмассовый конус, нижняя часть к-рого затянута пергаментом или животным пузырем. Диализатор с диализируемой жидкостью погружают в сосуд, заполненный растворителем (часто дист, водой). Низкомолекулярные вещества диффундируют через мембрану в растворитель и удаляются из диализируемой жидкости. В диализаторах Грэма Д. длится неделями и сопряжен с большим расходом внешней жидкости. Д. небольших количеств жидкости удобно проводить в мешочках из коллодия или целлофана, прикрепляемых к воронке с коротким и широким горлом (рис. 2).

Применявшиеся раньше для лабораторных исследований диализаторы Жигмонди — Гейера, Гутбира заменены на диализаторы, в которых используют полупроницаемые мембраны в виде листов, шлангов и капилляров (см. Искусственная почка). Существует ок. 100 различных моделей диализаторов. Если диализируемая жидкость не изменяется при нагревании, то для ускорения Д. ведут при нагревании.

Для ускорения Д. проводят в электрическом поле. Происходящий при этом процесс Д. называют электро-диализом, а применяемые для этой цели приборы — электродиализаторами. Диализируемую жидкость помещают в среднюю камеру между диализационными мембранами. В боковых камерах находится растворитель (дисперсионная среда), в который погружены электроды. При наложении на электроды постоянной разности потенциалов ионы низкомолекулярных веществ из средней камеры переносятся в боковые камеры, а молекулы неэлектролитов удаляются посредством электроосмоса (см.).

Д. применяют в следующих случаях. 1. Для установления наличия коллоидов и высокомолекулярных веществ в жидкостях. 2. Для очистки коллоидных р-ров и р-ров высокомолекулярных веществ (напр., белков) от примесей низкомолекулярных веществ. 3. Для приготовления ряда лекарственных препаратов. 4. Для определения концентрации низкомолекулярных веществ, находящихся в коллоидном р-ре в свободном, не связанном с коллоидом состоянии. Такого рода определения производят с помощью компенсационного Д., сущность к-рого заключается в том, что жидкость в диализаторе смывается не чистым растворителем (напр., водой), а р-рами с различными концентрациями определяемого вещества. Напр., свободный сахар в сыворотке крови, не связанный сывороточными белками, определяют путем Д. сыворотки против изотонического р-ра хлорида натрия, к к-рому прибавляют различные количества сахара. Концентрация сахара в солевом р-ре не меняется при Д. лишь в том случае, когда она равна концентрации свободного сахара в сыворотке. При определении компенсационным Д. концентрации свободных электролитов в коллоидных р-рах необходимо учитывать неравномерное распределение электролита по обе стороны мембраны вследствие установления мембранного равновесия (см.). 5. Для извлечения низкомолекулярных веществ из биологических жидкостей. Так, например, Абель (J. J. Abel) с сотр. (1913) применил для извлечения низкомолекулярных веществ из циркулирующей крови животных Д., названный ими вивидиффузией. На рисунке 3 дана схема диализатора для вивидиффузии. В стеклянном цилиндре находится несколько (до 32 и более) трубочек из коллодия диам. 8 мм и длиной 20 см. Концы трубочек соединены с рядом V-образных стеклянных трубок, припаянных к вводной и выводной трубкам, проходящим через резиновые пробки, запирающие концы стеклянного цилиндра. После наполнения трубок и цилиндра изотоническим р-ром хлорида натрия вводную трубку соединяют с сонной артерией животного, а выводную — с веной; жидкость, омывающую коллодийные трубки, поддерживают на уровне температуры крови при помощи термостата. Для предотвращения свертывания к крови добавляют гирудин. Т. о., кровь животного может длительное время проходить через диализатор без нарушения нормального хода кровообращения. В наружный физиол, р-р диффундируют из крови растворенные в ней низкомолекулярные вещества, которые могут быть определены качественно и количественно. Метод вивидиффузии применяют для внепочечного очищения крови (см. Гемодиализ) с целью удаления из нее токсических веществ.

Применение диализа в клинической практике

С 40-х гг. 20 в. принцип Д. начал широко использоваться как в экспериментальной, так и в клин, медицине. Впервые доказательства леч. возможностей Д. представили Абель и соавт., создавшие первый прототип аппарата, названный ими «искусственная почка». Перфузируя кровь животных через систему полупроницаемых трубок, омываемых диализирующим р-ром, они установили, что при этом удается удалять из нее метаболиты и токсические вещества экзогенного происхождения. На принципе Д. основан ряд современных леч. вмешательств, объединяемых термином «виводиализ».

Основными показателями к применению методов Д. в клинике являются интоксикации эндогенного (острая и хрон, почечная недостаточность) и экзогенного (отравление ядами, которые могут быть выведены с помощью Д.) происхождения.

Все методы виводиализа принято разделять на две группы: экстракорпоральный и интракорпоральный Д. Первая группа объединяет все методы, где очищение организма осуществляется экстракорпорально, для чего биол, среда, подлежащая обработке (кровь, лимфа и др.), выводится из организма и очищается с помощью специальных устройств; вторая — методы, при которых используются полупроницаемые свойства предсуществующих естественных мембран в самом организме.

Экстракорпоральный Д. включает гемодиализ, лимфодиализ и легочный диализ (с использованием экстракорпорально подключенного легкого). Наиболее широкое применение в клинике нашел гемодиализ (см.) с помощью аппаратов искусственная почка (см.). Гемодиализ — наиболее мощное из всех средств внепочечного очищения. Внедренный в леч. практику после создания в 1943 г. У. Колффом первого пригодного для клин, применения аппарата и в 1946 г. Н. Альваллем аппарата для ультрафильтрации, он обеспечил значительное снижение летальности при острой почечной недостаточности и позволил на протяжении длительного времени (до 10 лет и более) поддерживать жизнь больных, у которых удалены почки или их функция отсутствует, а также выводить яды при остром отравлении. Гемодиализ — основной метод подготовки больных к трансплантации почки и в случае необходимости поддержания их жизни в посттрансплантационном периоде. Как метод, так и аппаратура для гемодиализа постоянно совершенствуются. Одно из наиболее важных направлений — разработка системы, к-рую больной мог бы носить при себе. Возможным решением такой задачи является создание «искусственной почки», к-рая могла бы работать при минимальном количестве диализирующего р-ра. Другое перспективное направление — разработка устройства, принцип действия к-рого будет приближаться к механизму работы естественной почки (использование активной ультрафильтрации перфузируемой крови с последующей компенсацией перешедших в ультрафильтрат необходимых больному компонентов плазмы).

Своеобразный вариант экстракорпорального Д.— так наз. диалогический парабиоз, или перекрестный Д. Предпосылкой для разработки метода послужило предположение, что т. о. будет создана возможность обеспечить обмен между Аналитическими партнерами таких веществ, которые удаляются в диализирующий р-р или недостаток которых имеется у больного и не может быть пополнен при обычном гемодиализе. Суть его заключается в том, что вместо диализирующего р-ра в аппарате циркулирует кровь диалитического партнера или один и тот же диализирующий р-р перемещается через оба диализатора диализных партнеров. Партнерами могут быть животные одного или различных видов (напр., свинья — свинья, собака — коза). Сделаны попытки использовать Аналитический парабиоз и в клинике (человек — овца). Метод, однако, не вышел из стадии экспериментального изучения. Одна из возможных опасностей при использовании парабионтов различных видов связана с доказанной теперь возможностью перехода небольших количеств гетерогенного белка через мембрану диализатора.

Метод лимфодиализа основан на сборе лимфы (содержащей метаболиты практически в такой же концентрации, как и плазма) с последующей очисткой с помощью Д. и воз-вращением ее больному. Лимфу получают с помощью фистулы грудного протока,

Эффективность очищения при этом лимитируется небольшим количеством лимфы, к-рое можно получить,— как правило, не выше 10 л в сутки (при гемодиализе примерно 1 л крови за 5 мин.). Недостаток метода — относительная непродолжительность функции фистулы (обычно не более нескольких месяцев). Поскольку в лимфе клеточные формы представлены в основном лимфоцитами, предпринимались попытки использовать метод одновременно и для иммунол, подготовки к трансплантации почки (за счет удаления содержащихся в лимфе лимфоцитов и создания искусственной лимфопении в качестве фона, облегчающего последующую трансплантацию).

Подключение аллогенных или ксеногенных легких в эксперименте также использовали в виде одного из вариантов экстракорпорального Д. Методически этот вид Д. производят путем подключения сосудистой системы изолированных легких (через магистральные сосуды) к сосудистой системе реципиента. Помещаемые в специальную камеру легкие заполняют через бронхи диализирующим р-ром, который периодически заменяют на свежий. В эксперименте с помощью такого приема удавалось получить существенное снижение концентрации метаболитов (мочевины). Были отдельные попытки применить этот метод больным почечной недостаточностью.

К данной группе методов следует отнести и очищение с помощью Д. асцитической жидкости. В асцитической жидкости нередко содержится значительное количество полноценного белка (до 2,5%, реже более) и других необходимых организму веществ (аминокислот, гормонов и т. д.). Асцитическую жидкость можно удалять с помощью введенного в брюшную полость катетера, позволяющего многократно и атравматично осуществлять эту манипуляцию. После освобождения от шлаков асцитической жидкости с помощью Д. ее снова возвращают больному (внутривенно). Для уменьшения объема вводимой жидкости ее в случае необходимости подвергают ультрафильтрации (см.).

Интракорпоральный Д. включает перитонеальный, легочный, плевральный, жел.-киш. и др. Наиболее эффективен из перечисленной группы методов — перитонеальный диализ (см.), предложенный впервые Гантером (G. Ganter, 1923). Он заключается во введении в брюшную полость диализирующего р-ра, в который на основе диалитического взаимодействия могут переходить продукты метаболизма и токсические агенты. Этот вид Д. используют либо как фракционный (введение на установленное время определенного объема диализирующего р-ра с последующим его выведением и заменой новой порцией), либо как проточный (непрерывная перфузия р-ра через брюшную полость). По показателям очищения он примерно в 3—4 раза уступает гемодиализу. Применяют его для лечения больных с острой почечной недостаточностью и острыми отравлениями. Для лечения больных с хрон, почечной недостаточностью перитонеальный Д. применяют редко. Для атравматичного многократного подключения используют специальный катетер, созданы и применяются автоматизированные системы для приготовления и введения диализирующего р-ра по намеченной программе.

Легочный Д., предложенный Ван-Гемертом (A. G. М. van Gemert) с сотр. (1957), состоит в периодическом заполнении диализирующим р-ром собственного легкого или его доли. Экспериментальными исследованиями установлено, что легочный Д. позволяет удалять как продукты метаболизма, так и токсические агенты экзогенного происхождения (барбитураты, Тиоцианаты).

При плевральном Д., впервые предложенном Гантером, в качестве полупроницаемой мембраны используют плевру. В плевральную полость вводятся дренажи, через которые она периодически орошается диализирующим раствором. Применение этого вида Д. позволило увеличить сроки переживания собак с экспериментальной уремией, однако по показателям очищения он уступает перитонеальному Д. В литературе имеются сообщения о нескольких случаях применения плеврального Д. при почечной недостаточности, когда использование других методов внепочечного очищения оказалось невозможным. Первые попытки применения его при эмпиеме плевры в послеоперационном периоде у раненных в грудь оказались эффективными, поэтому и этот вид Д. входит в клин, практику.

Жел.-киш. (гастроинтестинальный) Д. подразделяется на несколько разновидностей в зависимости от используемого участка жел.-киш. тракта и особенностей методики. Желудочный Д. (гастродиализ, гастральный лаваж) при обычной технике его применения (периодическое заполнение диализирующим р-ром полости желудка с последующим его удалением) может привести к нежелательным сдвигам, связанным с выведением вместе с р-ром значительного количества желудочного секрета, в частности электролитов. Для предотвращения этого предложено введение в полость желудка баллона из полупроницаемой мембраны, заполненного диализирующим р-ром. Устраняя возможность нарушения водно-электролитного равновесия, эта техника уменьшает эффективность очищения. Интестинальный Д. (перфузия тонкого кишечника) обычно осуществляется с помощью специальных зондов для введения и удаления диализирующего р-ра. Д. через толстый кишечник проводится обычно через прямую кишку. Иногда для этой цели применяют фистулу аппендикса. Разработаны также методы Д. практически всего кишечника, при которых диализирующий р-р вводится в желудок или в тонкую кишку и выводится через прямую кишку. Последний метод требует, однако, особенно тщательного контроля как за состоянием больного, так и за параметрами перфузии. Особый вариант кишечного Д.— перфузия диализирующим р-ром выведенного через переднюю брюшную стенку изолированного участка тонкой кишки (1,8—2,5 м) Из-за недостаточной скорости очищения и осложнений данный метод непригоден для длительного использования и поэтому практически не применяется. Все разновидности гастроинтестинального Д. (особенно Д. толстого кишечника) характеризуются низкими показателями очищения и заметно уступают перитонеальному Д. и особенно гемодиализу. В связи с этим они, как правило, могут использоваться лишь в качестве временной меры, когда по тем или иным причинам нельзя применить более эффективные приемы внепочечного очищения. При проведении Д. следует обращать особое внимание на правильность составления диализирующего р-ра, что обеспечивает нужную коррекцию электролитного состава плазмы. Регуляция водного баланса достигается путем варьирования осмотического давления р-ра. Необходимо также учитывать, что различные отделы жел.-киш. тракта характеризуются неодинаковой скоростью перехода азотсодержащих метаболитов, электролитов и воды в просвет кишечника. Преимущество большинства методов этой группы — их относительная простота.

Попытки использовать для Д. слизистую оболочку матки и мочевого пузыря путем перфузии соответствующих полостей выявили их очень низкую эффективность, в связи с чем они детально не изучались. При клин, применении рассмотренных способов Д. выбор того или иного метода определяется особенностями больного и условиями, в которых проводится терапия. В ряде случаев по ходу лечения целесообразным оказывается смена метода (напр., замена перитонеального Д. гемодиализом и т. п.). Все используемые в клинике варианты Д. следует рассматривать как составную, хотя нередко и решающую, часть комплексного лечения больного.

Библиография: Воюцкий С. С. Курс коллоидной химии, с. 10, 255, М., 1975, библиогр.; Голигорский С. Д. и Терехов H. Т. Острая почечная недостаточность, Киев, 1972, библиогр.; Дерябин И. И. и Лизанец М. Н. Перитонеальный диализ, М., 1977; Лопаткин Н. А. и Кучинский И. Н. Лечение острой и хронической почечной недостаточности, М., 1972, библиогр.; Путилова И.Н. Руководство к практическим занятиям по коллоидной химии, М., 1961; Пытель А. Я. и др. Искусственная почка и ее клиническое применение, М., 1961, библиогр.; Хроническая почечная недостаточность, под ред. С. И. Рябовой, Л., 1976; Clinical aspect of uremia and dialysis, ed. by S. G. Massry a. A. L. Sellers, Springfield, 1976, bibliogr.; Praxis der Dialysebehandlung, hrsg. v. H. E. Franz, Stuttgart, 1973, Bibliogr.

E. Б. Горбовицкий, Э. P. Левицкий; В. П. Мишин (биохим.).

Источник

Концепция диализа была представлена ​​в 1861 году шотландским химиком Томасом Грэмом. Он использовал эту технику для разделения растворенных веществ сахарозы (малая молекула) и гуммиарабика (большая молекула) в водном растворе. Он назвал диффундирующие растворенные вещества кристаллоидами и те, которые не проходят через мембрану коллоидами.

Исходя из этой концепции, диализ можно определить как процесс самопроизвольного отделения взвешенных коллоидных частиц от растворенных ионов или молекул малых размеров через полупроницаемую мембрану. Чаще всего диализные мембраны изготавливаются из целлюлозы, модифицированной целлюлозы или синтетического полимера (ацетата целлюлозы или нитроцеллюлозы).

СОДЕРЖАНИЕ

Принципы диализа

Из-за размера пор мембраны большие молекулы в образце не могут проходить через мембрану, тем самым ограничивая их диффузию из камеры для образца. Напротив, небольшие молекулы будут свободно диффундировать через мембрану и достичь равновесия по всему объему раствора, тем самым изменяя общую концентрацию этих молекул в образце и диализате (см. Диализный рисунок справа). После достижения равновесия конечная концентрация молекул зависит от объемов используемых растворов, и если уравновешенный диализат заменен (или заменен) свежим диализатом (см. Процедуру ниже), диффузия еще больше снизит концентрацию малых молекул. в образце.

Диализ можно использовать для введения или удаления небольших молекул из образца, поскольку небольшие молекулы свободно перемещаются через мембрану в обоих направлениях. Это делает диализ полезным методом для множества применений. См. Раздел « Трубки для диализа» для получения дополнительной информации об истории, свойствах и производстве полупроницаемых мембран, используемых для диализа.

Наконец, ультрафильтрация, которая представляет собой конвективный поток воды и растворенных веществ вниз по градиенту давления, вызванному гидростатическими или осмотическими силами. При диализе ультрафильтрация удаляет из образца молекулы отходов и лишние жидкости.

Диффузионный диализ

Электродиализ

Доннан Диализ

Обратный электродиализ

Электро-электродиализ

Процедура диализа

Оборудование

Общий протокол

Типичная процедура диализа образцов белка выглядит следующим образом:

Общий объем образца и диализата определяет конечную равновесную концентрацию малых молекул по обе стороны мембраны. Используя соответствующий объем диализата и многократные замены буфера, можно снизить концентрацию мелких загрязняющих веществ в образце до приемлемого или незначительного уровня. Например, при диализе 1 мл образца против 200 мл диализата концентрация нежелательных диализируемых веществ будет уменьшена в 200 раз при достижении равновесия. После двух дополнительных замен буфера по 200 мл каждая, уровень загрязнения в образце будет снижен в 8 x 10 6 (200 x 200 x 200) раз.

Оптимизация переменных и протокола

Хотя диализ образца относительно прост, универсальная процедура диализа для всех применений не может быть предоставлена ​​из-за следующих переменных:

Кроме того, конечная точка диализа в некоторой степени субъективна и зависит от области применения. Следовательно, общая процедура может потребовать оптимизации.

Мембраны для диализа и MWCO

Диализные мембраны производятся и характеризуются в соответствии с предельными значениями молекулярной массы (MWCO). В то время как мембраны с MWCO в диапазоне от 1 до 1000000 кДа коммерчески доступны, наиболее часто используются мембраны с MWCO около 10 кДа. MWCO мембраны является результатом количества и среднего размера пор, созданных во время изготовления диализной мембраны. MWCO обычно относится к наименьшей средней молекулярной массе стандартной молекулы, которая не будет эффективно диффундировать через мембрану во время расширенного диализа. Таким образом, диализная мембрана с молекулярной массой 10 кДа обычно удерживает более 90% белка с молекулярной массой не менее 10 кДа.

Важно отметить, что MWCO мембраны не является четко определенной величиной. Молекулы с массой, близкой к пределу MWCO мембраны, будут диффундировать через мембрану медленнее, чем молекулы, значительно меньшие, чем MWCO. Чтобы молекула могла быстро диффундировать через мембрану, она обычно должна быть по крайней мере в 20-50 раз меньше, чем рейтинг MWCO мембраны. Следовательно, нецелесообразно отделять белок 30 кДа от белка 10 кДа с помощью диализа через диализную мембрану, рассчитанную на 20 кДа.

Диализные мембраны для лабораторного использования обычно изготавливаются из пленки регенерированной целлюлозы или сложных эфиров целлюлозы. См. Ссылку для обзора целлюлозных мембран и производства.

Форматы лабораторного диализа

Широкий выбор диализных устройств (или диализаторов) доступен от нескольких поставщиков. Диализаторы предназначены для определенных диапазонов объемов пробы и обеспечивают большую безопасность пробы, а также повышенную простоту использования и производительности при проведении диализных экспериментов с использованием трубок. Наиболее распространенными предварительно отформатированными диализаторами являются линейки продуктов Slide-A-Lyzer, Float-A-Lyzer и Pur-A-lyzer / D-Tube / GeBAflex Dialyzers.

Поставщики

Приложения

Диализ имеет широкий спектр применения. Их можно разделить на две категории в зависимости от типа используемого диализа.

Диффузионный диализ

Некоторые применения диффузионного диализа объясняются ниже.

Электродиализ

Некоторые применения электродиализа объясняются ниже.

Преимущества и недостатки диализа

Диализ имеет как преимущества, так и недостатки. Следуя структуре предыдущего раздела, обсуждаются плюсы и минусы в зависимости от типа используемого диализа. Преимущества и недостатки как диффузионного диализа, так и электродиализа описаны ниже.

Диффузионный диализ

Электродиализ

Основным недостатком электродиализа является ограничение плотности тока, процесс должен проводиться при более низкой плотности тока, чем максимально допустимая. Дело в том, что при приложении определенного напряжения диффузия ионов через мембрану не является линейной, что приводит к диссоциации воды, что снижает эффективность работы. Другой аспект, который следует учитывать, заключается в том, что, хотя для работы требуется низкая энергия, чем выше концентрация соли в исходном сырье, тем выше будет необходимая энергия. Наконец, в случае некоторых продуктов необходимо учитывать, что электродиализ не удаляет микроорганизмы и органические загрязнители, поэтому необходима дополнительная обработка.

Источник

Диализ что это биохимия

Методы выделения и анализа белков

Препараты высокоочищенных белков находят разнообразное применение в научных исследованиях, медицине и биотехнологии. Так как многие белки, и в особенности глобулярные, высоколабильны (см. с. 80), выделение проводят с помощью предельно мягких методов и при пониженной температуре (0-5°С). К таким методам относится ионообменная хроматография, которая обсуждалась на с. 68. Другие методы выделения белков представлены в этом разделе.

В настоящее время электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН) [ДСН-ПААГ-электрофорез (SDS-PAGE)] является общепринятым методом определения гомогенности белковых препаратов. Метод основан на свойстве заряженных частиц (молекул) перемещаться под действием электрического поля (см. с. 270). Обычно скорость миграции зависит от трех параметров анализируемых белков: величины молекул, формы молекул и суммарного заряда. Поэтому предварительно белки денатурируют с тем, чтобы скорость миграции зависела только от молекулярной массы. Для этого анализируемую смесь обрабатывают додецилсульфа-том натрия [ДСН (SDS)] (C 12 H 25 OSO 3 Na), который представляет собой детергент с сильно выраженными амфифильными свойствами (см. с. 34). Под действием ДСН олигомерные белки диссоциируют на субъединицы и денатурируют. Развернутые полипептидные цепи связывают ДСН (примерно 0,4 г/г белка) и приобретают отрицательный заряд. Для полной денатурации в среду добавляют тиолы, которые расщепляют дисульфидные мостики ( 1 ).

Электрофорез проводят в тонком слое полиакриламида ( 2 ). После завершения электрофореза, зоны белков выявляют c помощью красителя, В качестве примера на схеме 3 приведена электрофореграмма трех препаратов: клеточного экстракта, содержащего сотни белков ( а ); выделенного из экстракта гомогенного белка ( б ); контрольной смеси белков с известными молекулярными массами ( в ).

Источник