Что такое гистология в онкологии родинок
Жизненно необходимая гистология
Очень часто на приёме и в интернете люди спрашивают меня «Зачем мне платить за гистологию? Ведь у меня точно обычная бородавка (родинка), а не рак!»
В этой статье я расскажу зачем проводится это исследование и к каким печальным последствиям может привести отказ от него.
Как обследуется родинка перед удалением?
Существует несколько способов обследовать родинку перед удалением. К сожалению, ни один из них не обладает 100% точностью.
Да, 5 % ошибок не очень много и цитологию с дерматоскопией можно назвать точными методами. Вместе с тем, я уверен, что никто из нас не захотел бы оказаться среди этих 5%. Перспектива развития рака на месте удалённой родинки не понравится никому.
ВАЖНО. Ни один метод обследования, особенно простой осмотр, не точен на 100%. Врач, использующий для постановки диагноза только свои глаза может допустить смертельную ошибку.
Как обследуется родинка после удаления?
Как проводится морфологическое исследование?
Зачем обследовать родинку если она уже удалена?
Нет. В клинических исследованиях доказано, что «экономное, затем широкое иссечение» так же эффективно в лечении меланомы, как «сразу широкое иссечение».
Более того, между экономным и широким иссечениями может пройти до 60-90 дней. При этом, по данным исследований, прогноз течения меланомы не ухудшается.
Проговорим ещё раз с использованием схемы:
Ответ на этот вопрос зависит от того, кто проводил удаление.
Коротко о главном:
Другие статьи:
Полезная статья? Сделайте репост в Вашей социальной сети!
Как проводят гистологическое исследование образований кожи
Меня зовут Дмитрий Бейнусов, я – врач-дерматоонколог, занимаюсь лечением опухолей кожи: доброкачественных и злокачественных.
Гистологическое исследование опухолей, т. е. изучение характеристик ткани опухоли под микроскопом имеет большое, а иногда и решающее значение для лечения и прогноза. С 2011 года я направляю все удаленные образования кожи специалистам Национального центра клинической морфологической диагностики (НЦКМД); они уже почти 8 лет помогают мне с точной диагностикой.
Эту статью я написал с целью помочь своим пациентам и коллегам лучше ориентироваться в процессе гистологического исследования и понять, как это важно для лечения образований кожи.
Прочитайте эту статью до конца, и вы увидите, как в современных морфологических лабораториях максимально быстро и качественно выполняют исследования, а также сводят к минимуму вероятность человеческой ошибки.
Что такое гистологическое исследование и зачем его проводят
Согласно клиническим рекомендациям Минздрава РФ (2018), гистологическое (морфологическое) исследование – это стандарт диагностики при исследовании опухолей кожи и в первую очередь при подозрении на меланому или рак. Это обусловлено тем, что в настоящее время нет более точного метода для определения характера удаленного образования кожи.
Ни дерматоскопия, ни простой соскоб или пункция с последующим цитологическим исследованием, ни тем более простой визуальный осмотр подозрительной родинки не могут заменить гистологического исследования.
Мифы о гистологическом исследовании
Если ввести в поисковой строке слова «гистология родинки» или «гистология меланома» и посмотреть содержание первых, создается достаточно пугающее впечатление:
К сожалению, после ознакомления с информацией в отечественном интернете создается ощущение, что в нашей стране нередко гистологические исследования образований кожи делают «на коленке» и «неизвестно кто и где».
В статье я покажу, что есть другая реальность. Кроме того, назову ошибки, которые могут возникнуть на различных этапах исследования, и, самое главное, какими способами их исключить.
Важные для пациента моменты на этапах гистологического исследования операционного и биопсийного материала кожи
1. Регистрация материала
Наш путь начинается в тот момент, когда удаленная опухоль кожи, например родинка, попадает в лабораторию.
Предположим, что врач сделал все правильно.
Если врач все сделал именно так – смело сдаем контейнер и направление в лабораторию.
Администратор, получивший контейнер с родинкой, регистрирует ее – присваивает уникальный номер и QR-код. Эти данные, фамилию и инициалы пациента пишут на специальной кассете, в которой удаленная родинка пройдет все этапы исследования. Мне удалось заснять процесс изготовления кассет и их маркировки:
Все рабочие места врачей и лаборантов оборудованы сканерами QR-кодов. Они позволяют на любом технологическом этапе определить, кому принадлежит материал, и работать с ним. Таким образом, ошибка «перепутали родинки разных людей» в лаборатории исключена.
В Центре трепетно относятся к личным данным пациентов, поэтому Ф. И. О. на этом и других фото намеренно закрыты.
2. «Вырезка» и «фиксация»
Далее родинку внимательно осмотрят, опишут в протоколе и поместят особым образом в специальную пластиковую кассету для дальнейшего процесса. Весь процесс фиксируют на цифровую камеру. Видео понадобится в случаях неправильного расположения части родинки в кассете, когда нужно будет вернуться к этому этапу и переориентировать фрагмент.
Из промаркированного контейнера с транспортной средой извлекают родинку (невус):
Далее пигментное образование разделяют на несколько частей таким образом, чтобы для гистологического исследования были доступны все участки образования. Здесь все нужно сделать правильно, чтобы точно определить толщину меланомы по Бреслоу, состояние краев резекции кожи с опухолью – эти параметры имеют решающее значение в оценке адекватности операции и в прогнозе заболевания.
На кассете с родинкой пишут фамилию и инициалы пациента, которые были указаны на контейнере, а также QR-код и персональный числовой код.
Фрагменты размещают в кассете параллельно плоскости ее дна, как показано на картинке ниже. Если фрагмент положить перпендикулярно плоскости кассеты – это может затруднить оценку краев резекции, т. е. полноты удаления родинки или меланомы.
На правильном размещении фрагментов в кассете остановимся подробнее. Это очень важный момент, который позволяет избежать неинформативных срезов в будущем.
Чтобы исключить подобные ошибки, в процессе исследования используют автоматизированное оборудование.
После того как фрагмент уложат правильно, кассету плотно закрывают, что исключает утрату кусочков и переориентацию на последующем этапе 18–24-часовой фиксации операционного материала в специальном растворе (формалине).
3. Проводка
Этот этап проходит полностью в автоматическом режиме. Лаборант только загружает кассеты в гистопроцессор, выбирает программу и запускает ее.
Кассеты помещают в металлический бокс специальной камеры в верхней части аппарата.
Растворы из резервуаров в нижней части аппарата по очереди перекачиваются в камеру с кассетами. Каждая жидкость контактирует с фрагментами родинки (невуса) в течение определенного времени, после чего ее откачивают из камеры и заливают новую.
Кассета с фрагментами родинки проходит сложный процесс обезвоживания и подготовки к следующему этапу. Внешний вид ее остается прежним, но внутри происходят изменения:
После завершения этого этапа фрагменты уменьшаются, именно поэтому размеры родинки на стеклопрепарате при гистологическом исследовании примерно на 10 % меньше, чем ее реальный размер до удаления на коже.
4. Заливка парафином
Чтобы изготовить максимально тонкий срез с родинки, ее нужно надежно зафиксировать внутри плотного материала. Парафин идеально подходит для этого – он становится жидким при 56–58 градусах и быстро застывает уже при комнатной температуре.
На этом этапе, как и на предыдущем, все делает автомат, лаборант лишь загружает кассеты без парафина и достает уже готовые к получению срезов парафиновые блоки.
К сожалению, заснять, что происходит внутри аппарата в процессе работы, невозможно, но, к счастью, есть видео с сайта производителя оборудования (sakuraus.com):
Автоматический процесс обеспечивает самое важное – неизменное положение фрагментов родинки (невуса) в кассете. Оно остается неизменным с момента, когда патоморфолог разделил родинку на несколько фрагментов и аккуратно уложил их в кассеты (см. раздел «Вырезка»).
Конечный продукт этого этапа – фрагмент родинки (невуса) с сохраненной исходной ориентацией и залитый парафином.
5. Приготовление срезов
Этот этап выполняет лаборант. Прибор, делающий тканевые срезы толщиной в несколько микронов, называется микротом. Срезы настолько тонкие, что разрушаются, если брать их руками. Поэтому сразу после нарезки их переносят в воду определенной температуры, а из нее – сразу на предметное стекло с персональной наклейкой с QR-кодом, числовым номером и Ф. И. О. пациента.
Конечный продукт этого этапа – НЕокрашенный срез из парафинового блока, расположенный на предметном стекле.
6. Окраска и «заключение» окрашенных срезов
На этом этапе лаборант загружает неокрашенные стекла в специальный аппарат, выбирает программу автоматической окраски и запускает ее. Вероятность любых технологических ошибок при этом сведена к нулю.
Роботизированный аппарат переносит кюретку с окрашиваемыми стеклами поочередно из одного красителя в другой, задерживаясь в одном положении в течение запрограммированного времени. После завершения окраски срезы автоматически покрываются специальной пленкой для защиты от повреждений при исследовании и последующем длительном хранении.
Вот красивый ролик о процессе с сайта производителя оборудования:
А вот небольшой фрагмент работы аппарата в лаборатории, который мне удалось заснять:
После завершения процесса из агрегата извлекают полностью готовые для последнего исследования стеклопрепараты.
8. Изучение препарата врачом-патоморфологом
Наконец родинка (невус) готова к изучению под микроскопом.
В современной лаборатории, такой как НЦКМД, на этом этапе также используются современные и высокие технологии. Но есть два момента, на которые, на мой взгляд, стоит обратить особое внимание.
Морфометрия
С помощью адаптера для микроскопа и специализированной программы врач-патоморфолог на экране компьютера измеряет параметры удаленной родинки в микрометрах (микронах).
Мне, как дерматоонкологу, это особенно важно для последующих измерений, к примеру, толщины по Бреслоу в случаях меланомы, а также расстояний от края опухоли до края резекции.
На картинках ниже примеры программного измерения различных участков препарата невуса кожи:
Коллегиальное мнение
До недавнего времени я не знал, что все заключения НЦКМД с диагнозом «злокачественная опухоль» выходят с подписью нескольких морфологов. Такой подход мне нравится и лишний раз подтверждает, что я не ошибся с выбором лаборатории.
Удаленные консультации
Благодаря передаче изображений препаратов на компьютер, открываются широкие возможности. На картинке ниже – специальный сканер гистологических препаратов VisionTek:
Он позволяет врачам-патоморфологам:
9. Выдача заключения пациенту
Времена, когда гистологическое заключение выдавали в определенное время и ехать за ним нужно было через весь город, давно прошли. Сейчас результаты исследований из патоморфологической лаборатории отправляют по электронной почте сразу по мере готовности. Национальный центр клинической морфологической диагностики использует эту форму связи с медицинскими учреждениями и пациентами более 4 лет.
В заключении обязательно будут отмечены важные моменты:
Заключение
Теперь вы в деталях знаете, какой путь проходит удаленное образование кожи в современной патоморфологической лаборатории.
Коротко перечислю главные преимущества Центра, благодаря которым я сотрудничаю с этой лабораторией:
Я, как дерматоонколог, уверен, что, отправив удаленное образование кожи в НЦКМД, гарантированно получу достоверный диагноз.
P.S. От всего сердца хочу поблагодарить сотрудников Национального центра клинической морфологической диагностики, без помощи которых я бы не написал эту статью.
Другие статьи:
Полезная статья? Сделайте репост в Вашей социальной сети!
Гистология родинки: этапы исследования и частые вопросы пациентов
Что это за исследование – гистология? Как оно делается, когда его можно проводить, какие есть виды и что делать с результатом. Кроме этого, в статье мы рассмотрим возможные опасности, которые могут подстерегать при гистологическом исследовании родинок.
Этапы гистологического исследования: сроки и причины задержек
Существует несколько этапов гистологического исследования. Не буду подробно разбирать их детали, просто перечислю и коротко раскрою суть:
1. Биопсия, т. е. удаление родинки. Основное, что здесь хочу отметить – материала для исследования не бывает «мало». Часто мне пишут: «Доктор сказал, что образование слишком маленькое, отправлять на исследование будет нечего, поэтому гистологии у меня не было». В моей практике были случаи, когда приходило нормальное заключение по родинке размером до 1 мм. Поэтому, каким бы огромным «паяльником» ни удаляли родинку, важно отправить фрагмент максимально возможных размеров на гистологию. Это, безусловно, хуже, чем исследовать весь невус, однако значительно лучше, чем ничего.
2. Фиксация материала. Чтобы родинка не разложилась, пока ее доставляют в лабораторию, необходимо уничтожить микроорганизмы и деактивировать ферменты клеток родинки. Делают это с помощью специальных растворов. Сразу после удаления родинку помещают в раствор формалина. Можно его заменить спиртом, но этот вариант менее распространен 🙂
3. Промывка материала. Для удаления следов фиксирующей жидкости материал промывают, как правило, в течение нескольких часов в проточной воде.
4. Обезвоживание. Предварительная подготовка к заливке парафином.
5. Уплотнение (заливка). Промытую и обезвоженную родинку заливают жидким парафином. Это необходимо для того, чтобы можно было сделать максимально тонкие срезы, пригодные для исследования под микроскопом. В результате получаются вот такие парафиновые блоки.
6. Приготовление срезов. С помощью специального прибора – микротома – делают срезы толщиной около 0,05 мм.
7. Окрашивание материала. Это необходимо, чтобы различить под микроскопом различные клетки и ткани. В неокрашенном материале все структуры преломляют свет одинаково и рассмотреть ничего не удастся.
8. Заключение срезов. Так называется расположение окрашенных срезов между двумя стеклами.
9. Завершающий этап – врач-патоморфолог кладет стекло под объектив микроскопа и выносит свое заключение по исследуемому материалу.
Все этапы гистологического исследования занимают не более 10 дней. Самый быстрый этап, на мой взгляд, изучение патоморфологом препаратов. В некоторых передовых лабораториях, за счет высокой автоматизации всех перечисленных процессов, гистологическое исследование выполняется за 48 часов.
И порой меня удивляют пациенты, которые рассказывают, что гистологическое исследование проводили два месяца и более. Если с вами такое произошло – стоит позвонить в лабораторию и узнать, в чем сложности.
Одна родинка – один контейнер с ФИО!
Если гистологическое исследование родинки выявляет меланому – место удаления должно быть повторно иссечено более широко. Захват здоровых тканей определяется в зависимости от толщины по Бреслоу.
Хочу обратить внимание, если все удаленные родинки положить в один контейнер – они смогут пройти гистологическое исследование. Но установить при этом, где именно была меланома, в такой ситуации уже не удастся и придется делать широкое иссечение на местах всех удаленных родинок. Чтобы было правильное представление об объеме удаляемых тканей, можно посмотреть на фото и увидеть, как выглядит среднестатистический рубец.
Важно! Если вам удаляют несколько родинок, при отправлении их на гистологию должна быть четко обозначена локализация каждого невуса.
Но удалять одномоментно так много родинок, как на фото, не стоит. Почему? Расскажу в следующих публикациях.
Как быстро родинку должны доставить в лабораторию?
Здесь хорошие новости. Родинка, полностью погруженная в формалин, может лежать в контейнере до нескольких недель. При этом качество материала не ухудшается. Объем формалина должен быть примерно в 50 раз больше объема родинки.
«Можно не забирать ответ? Мне позвонят, если что-то не так?»
Конечно, можно и не забирать ответ, а потом писать вот такие сообщения на форумах:
Пожалуйста, не подумайте, что я смеюсь над трагедией. Это только способ привлечь ваше внимание.
Насколько мне известно, не существует закона, согласно которому морфологическая лаборатория должна оповещать пациента о выявлении онкологического заболевания. В конце заключения после исследования родинки могут написать: «Повторный осмотр с результатами гистологического исследования». Только эти заключения никто не читает.
А дальше все происходит по классическому сценарию, даже если в учреждении звонки такого рода в порядке вещей, срабатывает человеческий фактор. К примеру, ответственный за это человек уволился, или его кто-то замещал, или он заболел, не записал, был день рождения и пр. – в итоге никто не позвонил, а пациент даже не знал, что это могли сделать. Помните, что здоровье ваше и никто вам ничего не должен.
Пожалуйста, всегда забирайте результат гистологического исследования и всегда показывайте его онкологу, проводившему удаление.
«Я забрал(а) гистологический ответ, что с ним делать? Я сам(а) разберусь?»
Нет. Если вы получили результат исследования в бумажном или в электронном виде – его обязательно надо показать онкологу, проводившему удаление. Приведу такой пример.
В первом случае требуется повторное иссечение места удаления родинки, а во втором – нет. Поэтому не ленитесь, покажите заключение врачу.
Бывают ли ошибки при гистологическом исследовании невусов
Да, к сожалению, они возможны. Я писал об этом. Гистологическое исследование проводят люди, и они могут ошибаться. Если у вас возникли малейшие сомнения в результатах заключения, заберите ваши гистологические препараты и отдайте на пересмотр в другую лабораторию. К препаратам относятся как парафиновые блоки с тканью родинки, так и стекла со срезами.
Вы спросите: «Как это я пойду что-то забирать? Меня ведь пошлют. » Если вам не выдают гистологические препараты, значит, нужно пойти к главному врачу и потребовать. По моему опыту, после этого все отдают.
Где лучше делать и пересматривать гистологию?
Лично мое мнение, основанное на опыте, – гистологию лучше делать в крупных онкологических учреждениях.
Почему папилломы не отправляют на гистологию?
Основное свойство злокачественной опухоли – бесконтрольное деление клеток. Папиллома представляет собой небольшое (1–3мм) образование на тонкой ножке мягкой консистенции. Если бы клетки папилломы были злокачественными – они бы проросли «ножку», и папиллома ее потеряла. Кроме этого, консистенция мягче окружающей кожи, на мой взгляд, всегда говорит о доброкачественности. Этот случай – единственный, когда, по моему мнению, материал можно не направлять на гистологию.
Нужно ли гистологическое исследование бородавки?
На этот вопрос, если честно, я уже устал отвечать. Я просто приведу 2 гистологических заключения, которые объединяет клинический (при осмотре) диагноз – бородавка.
Первый случай:
Мне не удалось проследить судьбу пациента и результат иммунногистохимического исследования. Однако в разговоре с морфологом я понял, что исход здесь может быть самым разным и не обязательно благополучным.
И второй случай:
Интраэпителиальная карцинома – не самое страшное, что может быть. Болезнь Боуэна (а это именно она) – всего лишь нулевая стадия плоскоклеточного рака, которая успешно излечивается удалением в пределах здоровых тканей. Однако, ещё год-другой, и последствия для мужчины могли быть плачевными.
Вывод: бородавки нужно отправлять на гистологию. Всегда. Какими бы родными они вам ни казались.
Резюме, или Коротко о главном
Гистологическое исследование – залог безопасного удаления родинок и других образований кожи. Всегда настаивайте на гистологии для всего, кроме мелких мягких папиллом. Отдавать предпочтение стоит лабораториям крупных онкологических учреждений. Гистологическое заключение всегда нужно забирать лично и показывать врачу, проводившему удаление.
Другие статьи:
Полезная статья? Сделайте репост в Вашей социальной сети!
Как проводится гистологическое исследование: виды, методы, особенности
Злокачественные новообразования — это группа заболеваний, насчитывающая несколько тысяч видов опухолей разных типов и разной степени злокачественности. Они подразделяются на большие группы в зависимости от того из каких тканей они развиваются: если из эпителиальных (барьерных) — то это раки, если из соединительных тканей (мягких тканей и костей) – саркомы, если из лимфоидных (иммунных) – лимфомы/лейкозы. От того насколько правильно верифицирована опухоль (определен ее тип, степень злокачественности и другие характеристики) зависит правильность и эффективность лечения. Важную роль в этом играют гистологические исследования.
О том, как проходят гистологические исследования, какие задачи кроме диагностических они позволяют решать, что влияет на сроки их выполнения рассказывает заведующая патологоанатомическим отделением с прозектурой НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, к.м.н. Анна Сергеевна Артемьева.
Что служит материалом для патоморфологических (гистологических) исследований?
Процесс получения фрагмента ткани (биоптата) — биопсия – это несколько разных способов забора материала для гистологического исследования.
Биопсию внутренних органов делают под УЗИ-навигацией, либо с помощью хирургического вмешательства.
Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?
1 Этап. Фиксация — «консервирование» биоптата в формалине — специальном химическом растворе, который предотвращает гниение, позволяет сохранить структуры ткани.
Фиксация биоптата может занимать от 6 до 24 часов – в зависимости от его вида и размера.
Операционный материал фиксируется дольше, в несколько этапов. Сначала предварительная фиксация, которая занимает примерно 12 часов. Затем вырезка нужных фрагментов и повторная фиксация еще 24 часа.
Соотношение объема материала к объему формалина должно быть 1:20.
2 Этап. Процессинг — процесс обезвоживания, обезжиривания и пропитки материала парафином. Автомат перемещает кусочек материала из раствора в раствор.
В качестве растворов применяются: абсолютированный изопропиловый спирт (6-8 смен), ксилол (2 смены), расплавленный парафин (2 смены).
Программа разнится для «жирного» материала (к которым относятся, например, ткани молочной железы) и «нежирного» – 36 и 24 часа соответственно.
Процесс получения парафиновых блоков.
3 Этап. Изготовление парафинового блока. Кусок материала помещается в форму с расплавленным парафином (уже другим нежели во время процессинга – с более высокой температурой плавления) и охлаждается. Выполняется вручную, сложно ускорить.
4 Этап. Изготовление срезов. Толщина образца — кусочка ткани, залитого в парафин – 1-3 мм. Толщина каждого среза 4-5 мкм (0,004-0,005 мм). Выполняет лаборант с использованием специального инструмента – микротома.
Срезы монтируются на стекла и должны высохнуть.
Несмотря на то, что часть материала теряется при выравнивании в микротоме, при должном профессионализме, из одного образца — материала от одной биопсии, операционного материала от одной опухоли, возможно изготовить около 100 стекол (микропрепаратов).
Для чего делаются срезы?
Срезы делаются для рутинной окраски гематоксилинном и эозином, иммуногистохимического исследования и других видов исследований.
Срезы для всех исследований используются одинаковые, различается окраска, могут отличаться стекла, на которые они монтируются, так для ИГХ и FISH нужны специальные адгезивные стекла или заряженные стекла.
Блоки и стекла способны храниться долгие годы и использоваться для проведения дополнительных гистологических исследований, пересмотров, а также в научных целях.
Архив гистологических материалов собирается в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова с 1927 года и содержит более 10 млн единиц хранения (микропрепараты — стекла, парафиновые блоки, архивные карточки, влажный архив).
Какие виды гистологических исследований наиболее информативны?
Что позволяют определить разные виды гистологических исследований
Гистологическое исследование – что это такое?
Позволяет верифицировать опухоль – то есть определить из каких клеток она состоит (из какой ткани она развивается), степень ее дифференцировки (зрелости).
Рутинная окраска, выполняющаяся при гистологическом исследовании, позволяет выявить патологический процесс в анализируемом материале (биоптате, операционном материале):
Также, в большинстве случаев, благодаря рутинной окраске, можно определить степень злокачественности опухоли и, если она достаточно зрелая, то какова ее природа.
Окрашенные срезы под микроскопом
 |
Инвазивный протоковый рак er 100%.
Карцинома сигмовидной кишки.
Крупноклеточная нейроэндокринная опухоль.
МТС крупноклеточной нейроэндокринной опухоли.
Неспецифический рак молочной железы. Участок in situ карциномы внутри протока, криброзного типа.
Низкодифферинцированный рак пищевода.
При гистологическом исследовании биоптата и операционного материала можно оценить распространенность: размер опухоли и прорастание в окружающие ткани, насколько затронуты лимфоузлы и есть ли метастазы в отдаленные органы (если эти все структуры присланы для гистологического исследования). При консультации готовых микропрепаратов – стекол, это, как правило, невозможно, если опухоль больше размеров гистологической кассеты или рассечена предыдущим исследователем и не предоставлены данные макроскопического исследования.
Во время гистологического исследования изучаются все стекла от одного образца – материала, полученного от одного вмешательства — одной операции или одной биопсии, вне зависимости от их количества, это считается одной консультацией.
Сроки выполнения гистологического исследования зависят от количества микропрепаратов и от категории сложности того процесса, который в них обнаруживается, сроки могут удлиняться, особенно при необходимости использования дополнительных методов исследования и анализа дополнительных сведений. На сроки выполнения гистологического исследования влияет полнота предоставленной пациентом клинической информации, в том числе данных уже проведенных исследований.
Иммуногистохимия (ИГХ)
Сложное многоэтапное исследование, выполняется после гистологического исследования на том же материале. Опухолевые срезы окрашиваются антителами, которые способны связываться антигенами (белками), которые несут опухолевые клетки. Разные опухолевые клетки несут разные антигены, к каждому из которых подобно ключа к замку подходит антитело.
Один из этапов ИГХ
ИГХ исследование — это комбинаторика. 100% специфичных и чувствительных к какой-то опухоли маркеров не существует, но есть набор антигенов, которые в определенном типе опухоль должны быть и набор тех, которых там быть не должно, таким образом ИГХ-панель строится так чтобы включать несколько антител, которые должны быть позитивны и несколько, которые должны быть негативны. Для разных опухолей различаются эти наборы позитивных/негативных маркеров.
При проведении прогностической ИГХ – выявлении маркеров чувствительности к терапии определяется набор таких маркеров для конкретных опухолей, например, рака молочной железы: рецепторы стероидных гормонов (эстроген, прогестерон), рецептор эпидермального фактора роста (HER2) и индекс пролиферативной активности Ki67 (скорости деления клеток).
Стекла окрашиваются последовательно — различными антителами красятся наборы маркеров в несколько этапов, процесс окраски стекол одним антителом занимает 48 часов.
Таким образом, каждое антитело наносится на отдельный срез ткани, монтированный на отдельное стекло, как правило с соответствующим внешним контролем, количество реакций (используемых антител) и этапов окраски может существенно варьировать в зависимости от конкретной диагностической ситуации, все зависит от индивидуальных особенностей опухоли. Проводится такое количество окрасок, которое необходимо для того, чтобы выявить наиболее характерный для определенной опухоли набор позитивных и негативных маркеров.
Кому-то для этого будет достаточно 5 антител, а кому-то необходимо сделать 20 окрасок и более. Максимальное количество окрасок, которое нам приходилось делать – 212.
Поэтому точные сроки и стоимость этого исследования невозможно определить заранее. Разные по течению и прогнозу опухоли могут быть очень похожи друг на друга, только минимальные различия в окрашивании, с учетом клинических данных и данных других методов обследования, могут позволить установить верный диагноз.
Есть целый ряд доброкачественных опухолей, симулирующих злокачественные, в том числе высокоагрессивные, а некоторые злокачественные высоко дифференцированные опухоли трудно отличить от воспалительных и реактивных процессов. В таких ситуациях только опыт и квалификация патоморфолога, анализ всего комплекса доступной информации (снимки КТ, МРТ, рентген, протокол операции, и др.) позволяют поставить диагноз.
В грамотной интерпретации результатов ИГХ очень важна роль эксперта, ведь те случаи, с которыми приходится работать, в большинстве своем, сложные. Практически не существует антител, которые могут выступать в качестве 100%-х маркеров той или иной опухоли, врачу всегда приходится взвешивать различные вероятности.
Что определяется с помощью ИГХ?
Иммуногистохимия позволяет оценить потенциальный темп роста опухоли, ответ на химио-, таргетную, гормональную терапию.
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH-тест)
Это метод молекулярно-генетической диагностики в ткани.
FISH проводится в срезе ткани и позволяет привязать генетическую перестройку к конкретной опухолевой клетке.
В этом тесте также используются специальные красители, которые связываются только с определенными участками хромосом. Их называют зондами, которые могут быть помечены флуоресцентным или хромогенным красителем, визуализирующимися при помощи флуоресцентного или светового микроскопа.
Технические операции по подготовке гистологических стекол к этому исследованию занимает 2 рабочих дня.
Анализ препарата с помощью многоголового микроскопа.
Полученные микропрепараты очень чувствительны к внешней среде – они могут выцвести со временем, чтобы избежать потерь информации все FISH-препараты сканируются, создается их цифровая копия, которая доступна для внешнего пересмотра. Специалисты просматривают флуоресцирующий материал в темном поле, в анализе препарата принимают участие как минимум 2 специалиста. При необходимости используется и цифровой анализ.
Что определяется с помощью FISH-теста?
FISH-тест позволят диагностировать некоторые виды опухолей, определяет целесообразность использования некоторых химиотерапевтических препаратов.
Проведение гистологического исследования, и в первую очередь FISH-теста — это экспертная работа, которая зависит от квалификации специалиста. Очень многие мутации, которые выявляются в опухолях, не всегда являются метками опухолей, они могут находиться и в доброкачественных образованиях или нормальных тканях.
За год патологоанатомическое отделение НМИЦ онкологии имени Н.Н. Петрова выполняет около 20000 гистологических исследований (пациентов), из них около 5000 консультативных случаев (пересмотров), более 30000 ИГХ исследований, а также участвует в программе внешнего контроля качества ИГХ исследований NordIQ.
Специалисты отделения обладают огромным опытом проведения гистологических исследований и экспертными компетенциями.
Скорость выполнения гистологических исследований и адекватность гистологического заключения зависят от ряда факторов:
После выполнения гистологического исследования пациент получает гистологическое заключение/протокол исследования гистологического материала.
Расшифровка гистологического исследования: на что обратить внимание?
Гистологическое заключение включает в себя несколько рубрик (полей):
Макроскопическое описание
Заполняется как для биоптатов — не обязательно, так и для операционного материала, для которого имеет крайне важное значение в ряде случаев.
Микроскопическое описание
Описание изменений на микроскопическом уровне, не обязательно к заполнению, так как вся необходимая информация может быть отражена в поле «заключение».
Результаты иммуногистохимического исследования
В этом поле описано какие антитела использовались в данном случае и каков результат окрашивания: наличие окрашивание или его отсутствие, локализация в клетке при необходимости, а также процент позитивных клеток и интенсивность реакции, когда это имеет значение.
Патологоанатомическое заключение
Содержит нозологическую/классификационную единицу, если ее возможно установить по исследованному материалу, то есть дает ответы на вопросы:
Также приводятся все необходимые прогностические данные: степень дифференцировки, параметры, влияющие на стадию, состояние краев резекции, если возможно их оценить и т.п.
Дополнительные замечания и рекомендации
Поле может содержать комментарии, относительно возможного направления дальнейшего обследования, вероятности того или иного диагноза, необходимости ознакомиться с теми или иными клиническими данными и др.
Мы не рекомендуем пациентам самостоятельно заниматься расшифровкой показателей гистологического исследования, используя информацию, полученную на различных Интернет-сайтах и форумах пациентов, так как на интерпретацию данных влияет большое количество факторов, в том числе, возраст пациента, данные других исследований и др.
Расшифровкой исследования может заниматься только специалист – врач онколог по профилю заболевания!
Авторская публикация:
АРТЕМЬЕВА АННА СЕРГЕЕВНА
заведующий патологоанатомического отделения с прозектурой ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, кандидат медицинских наук