Пул генетически компетентной ДНК фага, образующийся во время вегетативного состояния фага, но ещё не собранный в законченные частицы фага.
двойная спираль ДНК — DNA double helix, double-helical structure of DNA, double-stranded DNA
Модель структуры ДНК, построенная Уотсоном и Криком, согласно которой молекула ДНК состоит из двух полинуклеотидных цепей, образующих правую спираль относительно одной и той же оси. Направление цепей взаимно противоположное.
Расхождение двух полинуклеотидных цепей ДНК в результате разрыва водородных связей при нагревании или под действием, например, щёлочи.
ДНК участков, соединяющих одну нуклеосому с другой.
Метилирование или глюкозилирование определённых оснований ДНК, обычно аденина или цитозина; процесс необходим клетке для защиты собственной ДНК от воздействия рестрикционной эндонуклеазы.
Двухцепочечная ДНК из клетки с интактными водородными связями между цепочками.
Одна цепочка ДНК, содержащая перевёрнутую последовательность оснований, которая может складываться в обратную сторону и таким образом гибридизоваться сама с собой.
Последовательности чужеродной ДНК, встроенные в клонирующий вектор.
Период синтеза ДНК в интерфазе.
Способность двойной спирали ДНК принимать различные конформации.
ДНК, образованная в результате объединения фрагментов ДНК разного происхождения. На рекомбинантной ДНК основан метод генетической инженерии in vitro.
ДНК, кодирующая рибосомную РНК.
сателлитная ДНК — satellitie DNA, highly-repetitive DNA
Кольцевая замкнутая ДНК, в которой число витков двойной спирали превышает величину, характеризующую линейную ДНК, находящуюся в тех же условиях. Сверхспирализация – важнейшее свойство ДНК, влияющее на её функционирование в клетке.
ДНК, располагающаяся между генами; транскрибируется не всегда.
Репаративный синтез в отличие от репликативного.
ДНК неизвестной функции.
ДНК, в которой последовательности оснований повторяются многократно в геноме клетки.
Тип упаковки генетического материала в клетках высших организмов.
химерная ДНК — chimeric DNA, hybrid DNA
Гибридная ДНК, полученная путём вставки фрагмента чужеродной ДНК в плазмиду.
ДНК, не содержащаяся в нормальном комплекте хромосомы данного организма. Встраивание такой ДНК может иметь место, например, при вирусной инфекции.
2 ДНК-п
3 ДНК
Тематики
4 ДНК
5 ДНК
6 ДНК
7 ДНК
8 ДНК
9 ДНК
10 ДНК
11 ДНК
12 ДНК
13 днк
14 ДНК
См. также в других словарях:
ДНК — (дезоксирибонуклеиновая кислота), НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, которая является основным компонентом ХРОМОСОМ ЭУКАРИОТОВЫХ клеток и некоторых ВИРУСОВ. ДНК часто называют «строительным материалом» жизни, поскольку в ней хранится ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОД,… … Научно-технический энциклопедический словарь
ДНК — Дудинка код аэропорта Красноярский край авиа, г. Красноярск, Красноярский край Источник: http://www.vinavia.com/airports/43644921008845416.shtml ДНК дробь никелевая карбонильная ДНК дистилированные нефтяные кислоты … Словарь сокращений и аббревиатур
ДНК — высокомолекулярное природное соединение, содержащееся в ядрах клеток живых организмов и вместе с белками образующее вещество хромосом. ДНК носитель генетической информации, ее отдельные участки соответствуют определенным генам. Молекула ДНК… … Начала современного естествознания
ДНК — [дээнка], неизм.; ж. [прописными буквами]. Буквенное сокращение: дезоксирибонуклеиновая кислота (высокополимерное природное соединение, содержащееся в ядрах клеток живых организмов, носитель генетической информации). * * * ДНК то же, что… … Энциклопедический словарь
ДНК — ДНК, то же, что дезоксирибонуклеиновая кислота … Современная энциклопедия
ДНК — то же, что дезоксирибонуклеиновая кислота … Большой Энциклопедический словарь
ДНК — см. дезоксирибонуклеиновые кислоты. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии
днк — сущ., кол во синонимов: 1 • кислота (171) Словарь синонимов ASIS. В.Н. Тришин. 2013 … Словарь синонимов
ДНК — ДНК. См. повторяющаяся нуклеотидная последовательность. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.
ДНК — [дээнк а], нескл., жен. (сокр.: дезоксирибонуклеиновая кислота) … Русский орфографический словарь
ДНК — (дезоксирибонуклеиновая кислота), входящая в состав хромосом живых организмов гигантская молекула (полимер), ответственная за передачу и сохранение наследственности. Экологический энциклопедический словарь. Кишинев: Главная редакция Молдавской… … Экологический словарь
Топик: HOW DNA TESTING WORKS (Анализ ДНК как проверяющие работы)
Название: HOW DNA TESTING WORKS (Анализ ДНК как проверяющие работы) Раздел: Топики по английскому языку Тип: топик Добавлен 09:07:56 30 сентября 2005 Похожие работы Просмотров: 76 Комментариев: 23 Оценило: 4 человек Средний балл: 5 Оценка: неизвестно Скачать
HOW “DNA” TESTING WORKS
The tools for solving rapes and murders have improved rapidly. Five years ago DNA tests couldn’t link suspects to hair or semen found on a victim. Today a crime lab can identify unique DNA patterns in a tiny sample of just 100 to 200 cells. The steps scientists take to implicate or exonerate suspects:
1) Collect biological materials from the crime scene and the suspect under investigation, such as blood, hair, semen or saliva. Every cell is a unique library of DNA sequences. The goal is to find out if the forensic and suspect’s samples match.
2) Isolate pure DNA by mixing the sample with chemicals that break down other cellular material. DNA molecules consists of paired filaments that interlock like zippers, and each filament is made up of chemicals “bases” (A, C, T and G) aligned in unique sequences.
3) Amplify the DNA by separating paired filaments and mixing them with short fragments known as primers. When a primer locks onto a particular site on a sample DNA molecule, it triggers production of a longer fragment that matches a piece of the sample.
4) Segregate the resulting DNA strands. A sample mixed with 13 primers multiplies into millions of distinctive molecules. Exposed to an electrical current, the molecules a sorted into color-coded bands on a gel.
5) Compare the crimescene samples with the suspect’s. Scientists say it’s virtually impossible for unrelated people to match up perfectly on 13 different levels. If samples do, odds that they’re from one person are overwhelming.
Helped prove the innocence of Anthony Porter, who at one point had been just two days shy of lethal injection for a pair of 1982 murders. Once again, the issue in Illinois wasn’t the morality of death sentences, but the dangerously sloppy way in which they were handed out. Once again a confession from another man helped erase doubt that the man convicted of the crime, who has an IQ of 51, had committed it.
By last fall the list of men freed from death row in Illinois had grown to 11. That’s when the Chicago Tribune published a lavishly researched series explaining why so many capital cases were suspect. The Tribune’s digging found that almost half of the 285 death-penalty convictions in Illinois involved one of four shaky components: defense attorneys who were later suspended or
The Porter case and the Tribune series were enough for Governor Ryan. On Jan. 31, he declared a moratorium on Illinois executions, and appointed a commission to see whether the legal process for handling capital cases in Illinois can be fixed. Unless he gets a guarantee that the system can be made perfect, Ryan told NEWSWEEK last week, «there probably won’t be any more deaths,» at least while he’s governor. «I believe there are cases where the death penalty is appropriate,» Ryan said. «But we’ve got to make sure we have the right person. Every governor who holds this power has same fear I do.”
But few are acting on it. In the wake of the Illinois decision, only Nebraska, Maryland, Oregon and Nrw Hampshire are reviewing their systems. The governors of the other states that allow the death penalty apparently think it works adequately. If they want to revisit the issue, they might consider the following factors:
The risk of errors: The more people on death row, the greater chance of mistakes. There are common elements to cases where terrible errors have been made: when police and prosecutors are pressured by the community to «solve» a notorious murder; when there’s no DNA evidence or reliable eyewitnesses; wnen the crime is especially heinous and draws large amounts of pretrial publicity; when defense attorneys have limited resources, if authorities were particularly vigilant when these issues were at play, they might identify problematic cases earlier.
Deterrence: Often the first argument of death-penalty supporters. But studies of the subject are all over the lot, with no evidence ever established of a deterrent effect. When parole was more common, die argument earned more logic. But nowadays first-degree murderers can look forward to life without parole if caught, which should in theory deter diem as much as die deadi penalty. It’s hard to imagine a criminals thinking: «Well, since Г might get the death penalty for this crime, 1 won’t do it. But if it was only life in prison, I’d go ahead.»
Fact-finding: Most states aren’t as lucky as Illinois. They don’t have reporters and investigators digging into die details of old cases. As die deadi penalty becomes routine and less newsworthy, the odds against real investigation grow even worse. Аж1 even when fresh evidence does surface, most states place high barriers against its use after a trial. This has been standard in the legal system for generations, but it makes little sense when an inmate’s life is at stake.
Whether you’re for or against die deadi penalty, it’s hard to argue diat it doesn’t need a fresh look. From America’s earliest days, when Benjamin Franklin helped develop the notion of degrees of culpability for murder, diis country has been willing to reassess its assumptions about justice. If we’re going to keep die deadi penalty, die public seems to be saying, let’s be damn sure we’re doing it right. DNA testing will help. So will odier fixes. But if, over time, we can’t do it right, then we must ask ourselves if it’s worth doing at all.
HOW “DNA” TESTING WORKS
The opening DNA is a new era in development of a science and society, it opens new opportunities, which were inaccessible earlier, and is capable to help not only scientist and patient, but also policeman with disclosing a crime. Now already it is impossible to present as five years ago managed without any help of DNA.
Now the laboratory can identify samples found on a place of a crime, with samples suspected, and then to make a conclusion about participation suspected with accuracy on 99 %.
The analysis DNA consists of five stages:
As the opening DNA has helped sharply to lower a judicial mistake, which were not a rarity, at removal court of a death penalty. Very much often executed the innocent people, which than could not prove the innocence. Now, at use DNA, the probability of a mistake has decreased in 99 times.
Certainly, use DNA very much helps investigation of crimes, but not everyone can it allow. As there are and many opponents, which act against an opportunity of use of the analysis DNA. As at DNA at all achievement has also problems, which should be decided, but that behind technology of the analysis DNA the future, already without disputable.
DNA – дизоксирибо нуклеиновая кислота (ДНК).
To collect – собирать.
To isolate – изолировать.
To Amplify – усиливать.
To Segregate – выделять.
To Compare – сравнивать.
Death-penalty – смертная казнь.
Disbarred – отмена запрета, разрешенный.
To consider – рассматривать.
Misunderstood – неправильно истолкованный.
Death-row – камера смертников.
Notorious murder – печально известное убийство.
Evidence – свидетельсво, очевидность.
Reliable eyewitnesses – надежные свидетели.
Pretrial publicity – гласность до суда.
To reassess – переоценивать.
ОНАЛИЗ «ДНК» КАК ПРОВЕРЯЮЩИЕ РАБОТЫ
Инструменты для раскрытия насилий и убийств улучшились быстро. Пять лет назад испытания ДНК не могли связать подозреваемых к их волосам или сперме, найденной на жертве. Сегодня лаборатория преступлений может идентифицировать уникальные образцы ДНК в крошечном образце только от 100 до 200 ячеек. Шаги ученых, чтобы вовлекать или реабилитировать подозреваемых:
3) Усилить ДНК, отделяя соединенные нити и смешивая их с короткими фрагментами известный как примеры. Когда пример захватывает на специфический участок на образце DNA молекулу, это вызывает производство более длинного фрагмента, который соответствует части образца.
4) Выделить получившийся результат ДНК. Образец, смешанный с 13 примерами умножается в миллионы отличительных молекул. Подверженные электрическому потоку, молекулы сортируются в закодированные цветом полосы на геле.
5) Сравнить найденные на месте преступления образцы с оброзцами подозреваемого. Ученые говорят, что фактически невозможно совпадение ДНК для несвязанных людей на 13 различных уровнях. Если образцы совпадают, то вероятность, что они являются от одного человека, подавляющая.
Помогали доказывают невиновность Энтони Портера, который в одном месте был только два дня, когда случились смертельные совпадения для пары убийств в 1982. Еще раз, проблема в Штате Иллинойс не была этика смертных приговоров, но опасно мокрого пути, которым они были розданы. Еще раз признание от другого человека помогло рассеивать сомнение, что человек, осужденный в преступлении, кто имеет ПОКАЗАТЕЛЬ ИНТЕЛЛЕКТА 51, совершил это.
Но немногие действуют на это. Вслед за решением Штата Иллинойс, только Штат Небраска, Штат Мэриленд, Штат Орегон и Nrw Гемпшир рассматривает их системы. Губернаторы других государств, которые позволяют смертную казнь очевидно, думают, что это работает соответственно. Если они хотят повторно посетить проблему(выпуск), они могли бы рассматривать следующие факторы:
— ли вы для, или против умирают deadi штраф, трудно обсудить diat, не требуется новый(свежий) взгляд. С самых ранних дней Америки, когда Бенджамин Фрэнклин помог развиваться, понятие градусов(степеней) виновности для убийства, diis страна желало переоценивать ее предположения относительно правосудия. Если мы собираемся держать, умирает deadi штраф, умирает, публика, кажется, говорит, давайте, проклят уверен, мы делаем это право. DNA испытание поможет. Так будет odier устанавливать. Но если, через какое-то время, мы не можем делать это право, тогда мы должны спросить нас, если это стоит делать вообще.
Небольшая справка по работе.
Тема ДНК, здавалась как отчет по домашнему чтению, т.е. по-нашему допуск к экзамену.
Здалвал ее в Саратове, Поволжская Академия Государственной Службы, 24 июня 2001г.
Преподаватель – Салеева Людмила Павловна.
О работе: текст отсканирован из научного журнала, составлено краткое содержание, и
Но разобраться можно, так что удачи, здать все на 5.
Пул генетически компетентной ДНК фага, образующийся во время вегетативного состояния фага, но ещё не собранный в законченные частицы фага.
двойная спираль ДНК — DNA double helix, double-helical structure of DNA, double-stranded DNA
Модель структуры ДНК, построенная Уотсоном и Криком, согласно которой молекула ДНК состоит из двух полинуклеотидных цепей, образующих правую спираль относительно одной и той же оси. Направление цепей взаимно противоположное.
Расхождение двух полинуклеотидных цепей ДНК в результате разрыва водородных связей при нагревании или под действием, например, щёлочи.
ДНК участков, соединяющих одну нуклеосому с другой.
Метилирование или глюкозилирование определённых оснований ДНК, обычно аденина или цитозина; процесс необходим клетке для защиты собственной ДНК от воздействия рестрикционной эндонуклеазы.
Двухцепочечная ДНК из клетки с интактными водородными связями между цепочками.
Одна цепочка ДНК, содержащая перевёрнутую последовательность оснований, которая может складываться в обратную сторону и таким образом гибридизоваться сама с собой.
Последовательности чужеродной ДНК, встроенные в клонирующий вектор.
Период синтеза ДНК в интерфазе.
Способность двойной спирали ДНК принимать различные конформации.
ДНК, образованная в результате объединения фрагментов ДНК разного происхождения. На рекомбинантной ДНК основан метод генетической инженерии in vitro.
ДНК, кодирующая рибосомную РНК.
сателлитная ДНК — satellitie DNA, highly-repetitive DNA
Кольцевая замкнутая ДНК, в которой число витков двойной спирали превышает величину, характеризующую линейную ДНК, находящуюся в тех же условиях. Сверхспирализация – важнейшее свойство ДНК, влияющее на её функционирование в клетке.
ДНК, располагающаяся между генами; транскрибируется не всегда.
Репаративный синтез в отличие от репликативного.
ДНК неизвестной функции.
ДНК, в которой последовательности оснований повторяются многократно в геноме клетки.
Тип упаковки генетического материала в клетках высших организмов.
химерная ДНК — chimeric DNA, hybrid DNA
Гибридная ДНК, полученная путём вставки фрагмента чужеродной ДНК в плазмиду.
ДНК, не содержащаяся в нормальном комплекте хромосомы данного организма. Встраивание такой ДНК может иметь место, например, при вирусной инфекции.
4 модификация
5 конечные продукты гликации
6 метилирование
7 ДНК метилирование
8 фрагментация днк
9 модификация
10 модификация
11 закрытая ДНК
12 липкие концы ДНК
13 липкий конец ДНК
14 молчащая ДНК
15 незаконный синтез ДНК
16 открытая ДНК
17 эгоистичная ДНК
18 B-ДНК
19 А-ДНК
20 ДНК А-конформация
См. также в других словарях:
РЕСТРИКЦИЯ И МОДИФИКАЦИЯ ДНК — (от позднелат. restrictio ограничение и modificatio видоизменение), специфич. р ции метаболизма ДНК в клетках бактерий, обеспечивающие защиту собственной ДНК от встраивания в нее последовательностей ДНК чужеродного происхождения. Функционирование … Химическая энциклопедия
ДНК-модификация — * ДНК мадыфікацыя * DNA modification … Генетика. Энциклопедический словарь
МОДИФИКАЦИЯ БЕЛКОВ — (от позднелат. modificatio изменение) биогенная, происходит после завершения трансляции матричной рибонуклеиновой к ты, или мРНК, (синтез белка на мРНК матрице) или до ее завершения. В первом случае М. б. наз. п о с т т р а н с л я ц и о н н о й … Химическая энциклопедия
Метилирование ДНК — Метилирование ДНК это модификация молекулы ДНК без изменения самой нуклеотидной последовательности ДНК, что можно рассматривать как часть эпигенетической составляющей генома. Метилирование ДНК заключается в присоединении метильной группы к… … Википедия
Рестрикция-модификация — Эндонуклеаза EcoRV в комплексе с расщепленным фрагментом ДНК. Система рестрикции модификации ферментативная система бактерий, разрушающая попавшую в клетку чужеродную ДНК. Основная её функция защита клетки от чужеродного генетического материала … Википедия
Посттрансляционная модификация — * посттрансляцыйная мадыфікацыя * posttranslational modification or protein maturation or p. processing изменения полипептидных цепей () после их синтеза. Включает в себя: отщепление (у прокариот) формильной группы от инициаторного… … Генетика. Энциклопедический словарь
Метилирование — * метыляванне * methylation высокоспецифичный процесс переноса метильных групп по молекуле ДНК, самая распространенная модификация ДНК. М. заключается в том, что к одному из нуклеотидов (см.) аденину или цитозину присоединяется СН3 группа.… … Генетика. Энциклопедический словарь
Клик-химия — была впервые описана Б. Шарплессом в 2001 году[1]. Данное понятие описывает химические реакции, приспособленные для быстрого и надёжного получения химических веществ путём соединения между собой отдельных маленьких элементов. Клик химия не… … Википедия
ПУРИНОВЫЕ ОСНОВАНИЯ — прир. производные пурина. Входят в качестве агликонов (неуглеводного компонента) в нуклеиновые к ты, нуклеозиды, нуклеотиды; фрагменты коферментов, витаминов и др. Канонические П. о. нуклеиновых к т аденин (6 аминопурин, сокращенно А) и гуанин (2 … Химическая энциклопедия
генная избыточность — * генны лішак * genetic redundancy наличие большого количества копий к. л. структурного гена на хромосоме, обычно в составе мультигенного семейства. Генная инженерия * генная інжынерыя * gene enginеering раздел генетической инженерии (см.), для… … Генетика. Энциклопедический словарь
ДНК не то, чем кажется. И то, чем кажется, тоже. Но не всегда.
иллюстрация автора статьи
Автор
Редакторы
Статья на конкурс «Био/Мол/Текст»: ДНК — основа жизни. В «сердце» клеточного ядра, в самом главном «узле» замысловатых путей метаболизма, в основании потока генетической информации покоится эта молекула — хранилище данных. Но только ли покоится? И ограничивается ли такое крупное и очень раннее изобретение эволюции «инертной» функцией хранения информации? Чтобы разобраться с этими вопросами, мы рассмотрим различные аспекты организации этой молекулы. Каждый из них может «выйти на первый план» при смене ролей ДНК — она может быть и матрицей для копирования, и местом хирургически точной посадки белков или сложных и динамичных взаимодействий с ними. В центре нашего внимания — свойства промоторов, участков, на которых начинается процесс транскрипции — «переписывания» ДНК в форму РНК. Место действия — крошечный геном бактериофага Т7 и его минималистические, очень похожие и такие различные промоторы.
Конкурс «Био/Мол/Текст»-2020/2021
Эта статья участвовала в конкурсе «Био/Мол/Текст»-2020/2021 в номинации «Своя работа» и будет опубликована в журнале «Природа».
Генеральный партнер конкурса — ежегодная биотехнологическая конференция BiotechClub, организованная международной инновационной биотехнологической компанией BIOCAD.
Спонсор конкурса — компания SkyGen: передовой дистрибьютор продукции для life science на российском рынке.
Спонсор конкурса — компания «Диаэм»: крупнейший поставщик оборудования, реагентов и расходных материалов для биологических исследований и производств.
Место ДНК в клетке и обществе
Представления о ДНК сейчас есть у любого. Рэперы упоминают ее в своих текстах, sci-fi-фильмы и сериалы показывают нам ДНК разноцветной и вращающейся, а ее имя и образ мелькают в дизайне и рекламе — виртуальных и уличных. Не столько с сожалением, сколько с иронией отметим: образ, порой напрочь потерявший асимметрию желобков и правильное число оснований на виток, не говоря уже о правозакрученности. А ведь есть еще и ДНК стиля или бренда. Действительно, двухспиральный, копирующийся, таящий информацию о самом сокровенном образ плотно «лег в руку» творческих людей. Но самое, пожалуй, неопровержимое доказательство врастания ДНК в культуру и язык — ее собственная пиктограмма. Мессенджеры даже предлагают данный значок для обозначения слова «наука» наряду с учеными в белых халатах, пробирками и телескопами (рис. 1).
Рисунок 1. Пиктограммы ДНК в различных мессенджерах и социальных сетях сделают разговоры о генетике короткими и образными. Важно только не забывать — ДНК не всегда длиной в несколько витков и не сугубо «слева направо вверх».
Всё это радует и служит популяризации науки, однако не стоит забывать что в жизни — в биологической жизни — ДНК — это, чаще всего, правозакрученная двойная спираль, шаг которой охватывает примерно 10 нуклеотидов.
В тени молекулярной догмы
Итак, дезоксирибонуклеиновая кислота чрезвычайно важна и хранит информацию — а именно генетическую информацию. Чтобы ее ценное содержимое не оставалось «вещью в себе», ДНК необходимо записывать, копировать и считывать. Такие «информационные связи» ДНК были емко сформулированы Фрэнсисом Криком в его центральной догме молекулярной биологии (обозначим кратко — ЦДМБ) вскоре после установления знаменитой двухспиральной структуры молекулы в 1953 г. Согласно этой «научной догме» информация, сохраненная в последовательности нуклеотидов ДНК, может:
И уже РНК далее способна (хотя и не обязательно — может просто функционировать в клетке сама по себе):
Простая и легко запоминающаяся схема ЦДМБ имеет всего 3 блока (соответствуют трем типам биополимеров) и 4 стрелки (соответствуют процессам, связанным с переносом информации). Она действительно стала столпом в центре молекулярной биологии, придала генетике новый смысл и оказалась «точкой роста» бесчисленных метаболических путей биохимии. И в центре центральной догмы — молекула ДНК! Однако рассматривая в ней блок ДНК, стоит помнить: «ДНК» здесь — это не вся и не всякая ДНК. Речь идет только о кодирующей ДНК, нуклеотидной последовательности которой предстоит быть транскрибируемой, а далее еще и транслируемой (причем не всегда). Репликация, впрочем, копирует всю молекулу, не разбирая областей разного типа. Зато точки ее начала — óриджины (от англ. origin — «начало») — имеют вполне определенное положение.
Что же осталось в тени процессов, объединенных информационными потоками центральной догмы? Что бы это ни было, ему есть где развернутся. На некодирующие области приходится большая часть эукариотических геномов (в случае человека — увесистые 98%). У прокариот их поменьше — в среднем, 20%. По началу такие области, не содержащие послание для передачи в РНК, называли мусорной ДНК (junk DNA) [1] и относились к ним с пренебрежением. Прошли годы, методики совершенствовались, знания неуклонно копились. И теперь мы знаем: в этом сумраке таится много полезного. Что же именно и в какой пропорции?
В некодирующей области ДНК есть, скажем, мобильные генетические элементы (прежде всего, способные перемещаться по геному транспозоны [2]), тандемные повторы разного сорта (от сателлитов до микросателлитов) [3] и прочее. Наконец, огромное значение имеют области ДНК, нужные для регуляции. Действительно, помимо блоков, ЦДМБ имеет еще и стрелки — они обозначают процессы передачи информации, вполне конкретные биохимические процессы.
Их делают возможными ферменты, по своей природе — белки. Целый «ансамбль» белков требуется для молекулярной хореографии при репликации, РНК-полимераза и ее свита необходимы при транскрипции и т.д. Важно помнить: ДНК — также активный и деятельный участник этих процессов [4].
Что регулирует эти сложные процессы, что управляет ими? Специфичное, хорошо оркестрованное взаимодействие ДНК и ДНК-связывающих белков. Дело в том, что в живой клетке (ткани, природе. ) все должно быть динамично и управляемо. Это жизненно необходимо и для разумного реагирования на удары судьбы (стрессы), и для разного рода взаимодействий клеток, и для индивидуального развития (онтогенеза).
И ДНК в этих межмолекулярных взаимодействиях подойдет не всякая: вряд ли транскрипция случайного участка генома станет разумной стратегией. В этом месте кажущаяся монотонной бесконечной ниткой с бусинами-нуклеотидами ДНК должна заиграть в нашем воображении новыми красками. В фокусе нашего внимания оказываются участники регуляции «со стороны ДНК» — ориджины репликации, промоторы, сайты формирования нуклеосом и т.п. И здесь ДНК не отделается снисходительным «позволением себя считать». Ее специализированные области регуляции чувствительны и деятельны. Они «ощущают» происходящее вокруг них — могут изменять свое состояние при изменении условий среды или при приближении «нацеленного» на них белка [5].
Притча о слепых белках и ДНК
Безусловно, ДНК далеко до структурного разнообразия белков с их неисчислимыми фолдами, укладками и т.п. Однако и у нее можно выделить иерархию уровней организации: от первичной (последовательность нуклеотидов) через небольшое разнообразие вторичных и третичных структурных блоков до четвертичной. Последняя представляет собой надмолекулярные объединения — как между разными молекулами ДНК, так и между ДНК и ДНК-связывающими белками.
Кодирующая функция той части ДНК, которая служит «матрицей» для синтеза других биополимеров, связана с особой организацией. А именно — информативные части генов руководствуются особыми «правилами грамматики» генетического кода:
и некоторыми другими.
Все эти законы не действуют на некодирующей части генома. А действуют совсем другие и для каждого типа последовательности они, в общем, свои.
Итак, работа ДНК как матрицы реализуется на уровне ее нуклеотидной последовательности. Она сводится к прочтению последовательности нуклеотидов в качестве своеобразного сигнала — такая информация может рассматриваться в отрыве от «физической сущности», самой молекулы ДНК. Об этом очень емко сказал Леонард Адлеман: «ДНК по своей сути что-то цифровое» (DNA is essentially digital). Разумеется, такому хранилищу байтов безразличны более сложные уровни организации — здесь ДНК лучше вытянуться в нитку и быть одномерной.
Таковы принципы кодирования и хранения генетической информации, изображенные в виде блоков ЦДМБ. А как насчет способов ее воплощения, то есть перевода информации одного биополимера в другой, а также всех последующих этапов экспрессии генов? Что стоит за стрелками на схеме догмы, соединяющей квадраты? Большая биохимическая работа и сложные структурные основы. Эти процессы протекают во вполне физической реальности — на них согласованно работают многие ферменты, факторы. Вовлечены в эту 3D-хореографию и специализированные области ДНК. Что же делает их такими специализированными?
В первом приближении — им следует связывать белковые молекулы. Для этого служат опять-таки разные уровни организации регуляторных ДНК: особая последовательность, структура и физико-химические свойства.
С первичной структурой (другой способ обозначить ее — сказать «нуклеотидная последовательность») все вроде проще. Если ДНК-связывающий белок находит целевой сигнал (особую последовательность нуклеотидов), то для начала связывается в этой локации. Такой сигнал может быть строгим и однозначным, как, например, в случае рестриктаз с вполне определенным сигналом из небольшого числа нуклеотидов и четким же положением, по которому происходит расщепление ДНК относительно него (в чем, собственно, и состоит задача этих эндонуклеаз) (рис. 3).
Рисунок 3. Сайт специфичного и точного связывания важной рестриктазы EcoRI и место разреза — расщепления ДНК
рисунок автора статьи
С белками вроде факторов транскрипции (TF) все посложнее. Уровень аффинности — то, насколько конкретные регулирующие уровень транскрипции белки активно связывают участок ДНК, — значительно разнится. Области ДНК, в принципе способные вызвать интерес фактора транскрипции, должны соответствовать некоторому нестрогому «фотороботу» последовательности. В результате сайтами их связывания может стать целый спектр различных первичных структур. В ряде положений им следует иметь вполне конкретный нуклеотид, в других — можно позволить себе некоторую свободу замены, в третьих — нет особой разницы, что за мономер находится в данном положении. Такие местами-строгие-местами-не-очень требования к участку ДНК описывают позиционными весовыми матрицами и изображают в виде логотипов последовательности. В них высота соответствующей буквы отражает вероятность нахождения здесь данного нуклеотида либо долю сайтов с этим мономером для рассматриваемого набора (рис. 4).
Картина напоминает притчу о слоне и трех слепых мудрецах. Кому-то достался бок, кому-то хвост или хобот. Однако ДНК-связывающих «мудрецов» в клетке существует огромное разнообразие, и спорить кто прав им ни к чему — это сугубо человеческое занятие.
Пo мере того, как ученые вникали в интимные стороны взаимодействий ДНК и ДНК-связывающих белков, они стали различать прямое (direct) и непрямое прочтения (indirect readout) нуклеотидной последовательности. В случае прямого прочтения распознавание и связывание двух биомолекул определяется теми парами оснований, которые, собственно, контактируют с белком. Здесь все понятно. Но уже довольно давно биологи стали отмечать: не вовлеченные в прямые взаимодействия нуклеотиды определяют стабильность и специфичность связывания. В этом и состоит непрямое прочтение.
В числе первых этот аспект распознавания описан на примере такого важного фактора транскррипции, как TATA-связывающий белок (TATA-binding protein, TBP). После этого последовало множество других примеров непрямого прочтения [6].
Но и этого мало: выделили также прочтение формы (shape readout) — оно определяется трехмерной формой дуплекса ДНК. В основе этого нового видения той же ДНК — вандерваальсовы и электростатические взаимодействия. Напомним, что прямое прочтение ДНК белком зависит от водородных связей, образованных конкретными нуклеотидами и аминокислотными остатками [7].
Едем дальше: поскольку для специфического связывания ДНК и белков им нужно найти друг друга в плотном и подвижном клеточном супе, начинать надо издалека. Для этого служат различные физико-химические параметры дуплекса, причем с довольно широким контекстом — влияние физики простирается довольно далеко. В определенных случаях — на тысячи пар оснований! Список важных для регуляторных ДНК качеств следует дополнить более крупномасштабной электростатикой, исходной изогнутостью и склонностью «прогибаться» под белком, термостабильностью и многими-многими (не преувеличение) другими.
Следующий пункт. Важность великого множества одних только физико-химических и структурных свойств (не забывая и первичную структуру!) связано с тем, что, скажем, транскрипция — процесс многостадийный, и на разных этапах одни параметры ДНК могут быть важнее других. Даже инициация транскрипции насчитывает несколько этапов: посадка белков, образование закрытого комплекса, плавление дуплекса (то есть расхождение цепей) с образованием открытого комплекса и т.д. Кстати, именно инициация транскрипции — в особенности на примере прокариотических промоторов и простых РНК-полимераз, — служит элементарной системой для изучения всей сложной кухни молекулярного узнавания [8], [9].
Игра «найди промотор»
Помимо развития фундаментальной науки — включая структурную биологию и молекулярную генетику — интерес к структурным и физическим основам ДНК-белковых взаимодействий растет и из насущной практической задачи. Речь об автоматизированной аннотации геномов: применении методов биоинформатики для предсказания положения участков ДНК различного типа. Данные на входе такого анализа сейчас как из рога изобилия сыплются из секвенаторов нового поколения (NGS) [10], и их нередко замедляют затруднения «сухой» части аннотирующего конвейера. Безусловно, неоценимую помощь ученым оказывают машинное обучение и анализ данных [11]. Однако проблема не только в их несовершенстве. Дело в том, что прямой учет последовательности («текста» и «букв») четко позволяет узнать кодирующие последовательности, организованные в виде триплетов. А вот с регуляторными участками все сложнее — структура и физико-химия ДНК определяются последовательностью в широком контексте, подчас неявно и противоречиво. Рассчитав профили разных свойств ДНК, настроив надлежащий размер скользящего окна и других параметров расчета вроде условий в клетке, мы можем лучше предсказывать «размытые» и плохо предсказываемые сайты для ДНК-связывающих белков. Из таких задач самые насущные — предсказание промоторов (давняя, но едва ли решенная проблема биоинформатики) и факторов транскрипции [8], [9], [12], [13].
«Бактериофаг системы Т7»
Прогресс в науках о живом знает немало научных революций и периодов прорывного развития. Такие вдохновляющие эпохи не всегда определялись новой концепцией или гениальным пророком. Иногда он был связан с находкой новой модельной системы, которая очень хорошо подходит для исследования определенного круга проблем. «Биомолекула» посвятила настенный календарь 2020 года таким «супермоделям» — эпохальным для науки исследуемым ею живым системам. Так, Neurospora grassa — плесневый гриб, имеющий гаплоидный набор хромосом и оттого немедленно фенотипически выдающий любые мутации; маленькая аквариумная рыбка Danio rerio — удобный объект для изучения развития позвоночных и т.д. Хорошей живую модель делает простота организации, удобство в содержании и «прозрачность» — легкость, с которой мы можем наблюдать интересующий нас целевой процесс или явление. В идеале в этом модельном объекте хотелось бы еще «что-то подкрутить и поломать», чтобы узнать, для чего же оно там было исходно.
На каком примере стоит изучать ДНК-белковые взаимодействия и дополнительные к кодирующим свойства ДНК? Хороший вариант — транскрипция, первая «стрелка» на пути от ДНК «вниз по центральной догме». В ней в ходе сложных и согласованных взаимодействий сразу многих молекул происходит инициация на вполне определенных и находящихся в положении «ВКЛ» в данный момент промоторах. А факторы транскрипции участвуют в этом на правах регуляторов процесса, садясь на некоторые сайты посадки либо покидая их. Эта вакханалия подставляет великое множество примеров молекулярного узнавания и иерархической регуляции.
Пожалуй, хотелось бы вариант попроще. Для этого стоит взяться за транскрипцию прокариот. Дело в том, что ситуация в мудреном случае ядерных пугает. У них (и, стало быть, у нас) есть как минимум три РНК-полимеразы, в растениях и вовсе пять, и для их инициации и последующей элонгации нужно немало вспомогательных белков-факторов. Бактерии же обнадеживают: РНК-полимераза у них единственная, всего лишь «о пяти субъединицах» (самая ходовая эукариотическая Pol II имеет 12) и снабжена комплектом сигма-субъединиц. Эти «пристегивающиеся» модули определяют специфичность прокариотической РНК-полимеразы — то, какие промоторы могут ее заинтересовать прямо сейчас. Дежурный из этих факторов, используемый чаще прочих на фазе роста культуры, — сигма-70.
Но и это не предел. Меньше бактерий только вирусы, в том числе, бактериофаги. Эти «пожиратели» прокариотических жертв имеют соответствующий генетический аппарат. И он может на фоне исключительной изобретательности таких наноразмерных паразитов поражать небывалой простой. Обратимся в качестве удобного и ну совсем элементарного примера полимер-полимерного узнавания и роли физико-химии ДНК в инициации ДНК к бактериофагу Т7. Это последний в ряду исходно описанных фагов, поражающих Escherichia coli (рис. 5).
Рисунок 5. Бактериофаг Т7 — срез через вирион (слева) и общий вид
Сложно представить себе что-то более просто устроенное, чем Т7. Вирион бактериофага или, скажем, комплекс поры ядра клетки — примеры того, как наноразмерные биологические структуры могут превзойти любого фантаста. Тут и икосаэдрическая вирусная частица, и хвостовые нити, и система «вбрасывания» чужеродной ДНК в клетку хозяина. Настоящий роботизированный зонд-подрывник!
Его жертва — кишечная палочка E. coli — самый популярный прокариотический объект для исследований. И Т7 — инфекционный агент — внедряется внутрь ее клетки. Точнее будет сказать «в клетку внедряется его геном» — он вбрасывается через канал в основании вирусной частицы, в то время как пустой «скафандр» остается на поверхности. Его задачей была доставка генома и специфическое связывание с E. coli. После этого начинается самое захватывающее — жизненный цикл бактериофага Т7.
Биография Т7 от начала до конца. До 3′-конца
Что же попало внутрь ничего не подозревающей и гигантской по сравнению с Т7 кишечной палочки? Молекула ДНК длиной около 40 тыс. пар оснований (килобаз), имеющая обе комплементарные цепочки. У вирусов бывает и совсем по-другому — на чем и основана система Балтимора. Не замкнутая в кольцо, а линейная ДНК, — в этом отношении тоже «всякое бывает». В 40 килобазах — и сам бактериофаг Т7 (в этот момент ничего больше у него не имеется), и история его жизни. У генома фага есть интересная особенность: его «левые» области (расположены ближе к 5′-концу) работают раньше, чем расположенные в середине и, тем более, прилегающие к 3′-концу. Получается, что Т7-ДНК «прочитывается» в правильном порядке слева направо. Поэтому ее разделяют на три последовательно «включающиеся» области. Пробежимся кратко по всем (рис. 6).
Рисунок 6. Геномная карта бактериофага Т7 — это и история его жизни «слева направо»
Ранняя область ближе всего в 5′-концу и включается первой. Она населена соответствующими ранними генами. Для их транскрипции не захвативший собственную РНК-полимеразу фаг «угоняет» таковую у E. coli. Для этого у Т7 имеются подходящие «посадочные площадки» — стандартные бактериальные промоторы. Пожалуй, разве что сильнее привлекающие прокариотическую РНК-полимеразу, чем ее собственные. Прием успешного паразита, отметим мы, — будь то бактериофаг или кукушка. К тому же многие из них «столпились» вместе у самого 5′-конца. В результате фазы I коварного плана бактериофаг изменяет состояние бактерии «под себя» и появляется его собственная Т7-РНК-полимераза, которая и берет дальнейшую транскрипцию (генов II и III класса) на себя.
Далее включается область генов II класса и соответствующих промоторов. Их задача — активная наработка ДНК бактериофага (ее репликация), а также синтез лизоцима — антибактериального фермента, с помощью которого потомкам бактериофага предстоит выбраться из гибнущей клетки. Стандартный сценарий для такого литического фага, как Т7.
Наконец, область генов и промоторов III класса. Их задача — обеспечить созревание фаговой ДНК, сборку новых вирусных частиц и затем упаковать одно в другое.
На этом жизненный цикл Т7 заканчивается литической и трагической концовкой. Весь экшн занимает обычно 17 мин, по минутам же расписано переключение между его фазами [13], [14]. Но остается довольно животрепещущий вопрос: что переключает активность областей этого элементарного генома?
Промоторы — промотируют, полимераза — полимеразит
Мы уже упоминали, что раннюю область Т7-ДНК транскрибирует «хозяйская» РНК-полимераза бактерии, а далее эту работу берет на себя фагоспецифичная Т7-РНК-полимераза. Стало быть, на одной небольшой ДНК соседствуют сильно различающиеся промоторы для этих двух ферментов. «Собственные» промоторы генома Т7 меньше: они имеют длину всего 19 нуклеотидов. Ферменты и сами не одного калибра: фагоспецифичная полимераза «весит» около 100 килодальтонов (кДа), бактериальная втрое увесистее. При этом транскрипционный дуэт «РНК-полимераза Т7 + промотор Т7» связывается очень точно и специфично, что пригодится в условиях, когда можно влезть в транскрипцию соседнего похожего фага.
Вопрос возникает в связи с тем, что промоторы Т7 из разных классов или даже внутри одного класса очень похожи по своей последовательности. Многие промоторы класса III и вовсе идентичны. Напомним: речь, идет о последовательностях рекордно малой длины — всего 19 нуклеотидов. Очень напоминают они по своей последовательности и таких фагов, как SP6 или, особенно, Т3. Каким же образом Т7-РНК-полимера различает «свои» промоторы и среди своих — те, которые пришла пора связать? Различать вроде как особенно нечего. (рис. 7).
Рисунок 7. Едва различимые последовательности очень непохожих по своим свойствам нативных промоторов бактериофага T7
Здесь на сцену выходят физико-химические свойства дуплекса промоторных областей. Они могут объяснить, как РНК-полимераза Т7 распознает их и специфично, и переключаемо. Для этого процесса молекулярного узнавания важнее именно уровень физико-химических свойств ДНК — что особенно явственно в случае предельно простой транскрипционной системы Т7 [14].
Какими же параметрами ДНК могут направляться взаимодействия биомолекул?
Задолго до прямого контакта молекулярному узнаванию промотора и полимеразы может способствовать электростатический потенциал. Действительно, если мы вспомним, что каждый ее мономер-нуклеотид имеет заряженную отрицательно фосфатную группу, станет понятно — на ДНК есть к чему притянутся положительному заряду. В полном соответствии со школьным законом Кулона. Действительно, ДНК-связывающие белки с этой целью снабжены положительно заряженными участками. В случае же промоторов Т7 присутствуют и особые мотивы распределения заряда [15]. Если мы рассчитаем значение заряда вдоль оси ДНК (на основе известной последовательности нуклеотидов), то получим характерные профили (рис. 8). Заметим, что свой профиль есть и у промоторов II и III класса — по ним, в частности, фаговая РНК-полимераза их и различает.
Рисунок 8. Профили электростатического потенциала для промоторов Т7: ранних, II класса и III класса
Следующее важное свойство ДНК — дестабилизация при скручивании. Сложно подобрать простое название этому параметру, так что приведем какое есть: вызванная суперспирализацией дестабилизации дуплекса ДНК (Stress-Induced Duplex Destabilization). Если коротко, модель SIDD — это способ описать, что будет с ДНК, если на нее как следует надавить, а точнее — скрутить. Дело в том, что одни последовательности в такой напряженной ситуации могут легко расплавиться (так называют расхождение цепей ДНК), другие — выстоят, третьи — плавятся совсем не там, где от них ждешь. Это свойство важно для взаимодействия ДНК с белками и, в частности, хорошо зарекомендовало себя для предсказания промоторов [9]. Как же обстоят дела с SIDD у промоторов Т7?
Рисунок 9. Профиль SIDD для генома Т7
рисунок автора статьи
Посмотрим на профиль SIDD для всего генома бактериофага Т7. Его действительно лучше рассматривать в крупном масштабе. Дело в том, что SIDD может быть очень чувствителен к изменениям последовательности, причем довольно непредсказуемым образом. Создатели этой модели продемонстрировали: небольшое изменение последовательности может резко изменить способность плавиться при суперспирализации участка ДНК, отдаленного от «мутации» на многие сотни пар оснований. По-видимому, такие эффекты использует и природа.
Из набора промоторов Т7 SIDD показывает следующий тренд. Если промотор представляет класс III, то он гораздо более легкоплавкий — цепи дуплекса такого участка ДНК расходятся при меньшей температуре и более низкой суперспирализации. Это неплохо соотносится с экспериментальными данными о том, что промоторы разных классов активны при разных условиях окружающей среды — включая как раз таки показатель суперспиральности [4], [9].
Другая закономерность затрагивает репликацию, для которой Т7-ДНК также является хорошей моделью. Этот геном имеет специализированный ориджин (точку начала репликации), отдаленный от 5′-конца на 17% длины генома. Однако его копирование может начинаться также в ряде других точек — и это как раз таки некоторые промоторы. Удивительно, но именно они относятся к числу дестабилизированных. Удивительно и осмысленно, поскольку репликация также может требовать особых физико-химических свойств дуплекса. В частности, легкость плавление дуплекса ДНК здесь точно не помешает [5].
Безусловно, на электростатике и SIDD важные физико-химические свойства ДНК не кончаются. Изучают и термостабильность, и изогнутость, энтропию, энергию стекинга (складывания нуклеотидов «тарелками» друг на друга) и бесчисленные другие [8].
Подобные закономерности физико-химических различий промоторов ранее оказались важны для бактерии — внутриклеточного паразита Mycoplasma gallisepticum. Ее геном содержит гены семейства vlhA, собственно, делающие этого патогена патогенным — способным «обходить» иммунную защиту хозяина за счет быстрой смены репертуара поверхностных антигенов. Выяснилось: гены vlhA снабжены промоторами [16], разительно отличающимися по физико-химии дуплекса от остальных промоторов генома [17].
Исчерпывающие мутанты
Сложный характер зависимости промоторной активности от физико-химических свойств ДНК и от нуклеотидной последовательности требует полных или по меньшей мере больших данных. Вот если бы получить все или почти все возможные варианты промотора Т7 и узнать, насколько они активны. А ведь в постгеномную эпоху и век дешевых NGS это как раз таки реализуемо! И уже проделано в отношении промотора Т7. В работе [17] использована высокопроизводительная методология: в небольшие фрагменты ДНК встроили почти 8 тысяч случайным образом измененных последовательностей промотора фага Т7, а также последовательности-метки (баркоды) — чтобы потом разобрать, кто есть кто. Далее напрямую замерили их промоторную активность. Имея в распоряжении полные последовательности (промотор + небольшой контекст), нетрудно и рассчитать те физико-химические параметры дуплекса, которые не требуют значительных участков ДНК на входе (SIDD здесь, к сожалению, отпадает — ведь для расчета этого параметра дуплекса нужны очень крупные фрагменты ДНК).
Что показала данная работа и последующий анализ данных о последовательности, физико-химии и величине промоторной активности? Прежде всего, она подтвердила многие выводы о важности отдельных нуклеотидов в конкретных положениях и согласованности таких замен. Нетривиальный результат: ранее для этого ученые не одно десятилетие скрупулезно изучали геном T7 с помощью доступных тогда методов. И теперь мы знаем, что высокопроизводительный, основанный на NGS подход — хороший способ разобраться в устройстве других промоторов и вообще вовлеченных в регуляцию областей ДНК. В том числе в новых, не исследованных геномах, которые нам поставляют бесчисленные секвенаторы.
В отношении теоретической стороны вопроса промоторно-полимеразного узнавания эти работы также дали интересный результат. Оказалось, что положение –2 промотора (если считать за единицу точку старта транскрипции), которому уделялось сравнительно мало внимания при описании структурных основ инициации, очень важно для физико-химических свойств ДНК. Действительно, замена данного нуклеотида способна резко изменить профиль электростатического потенциала или склонности к изгибам. В этом положении промоторы бактериофагов (не только Т7, но и нескольких других сходной «конструкции») почти всегда находятся нуклеотиды A либо T, в единичных промоторах из десятков — G или C (рис. 7). В пределах же промоторов Т7-ДНК нахождение А или Т определяется как раз принадлежностью к «противопоставленным» друг другу группам — классам II и III. Означает ли это особую миссию –2 положения промотора Т7 или нет? Мы надеемся, что эксперименты вскоре помогут это установить [18], [19].
Эта статья участвовала в конкурсе «Био/Мол/Текст»-2020/2021 в номинации «Своя работа» и будет опубликована в журнале «Природа».
