Что такое днк chlamydia trachomatis
Хламидии, и их роль в репродуктивной патологии
Возбудителем урогенитального хламидиоза является Chlamydia trachomatis – внутриклеточный паразит, близкий к грамотрицательным бактериям, но, в отличии от бактерий, они утратили способность выработки метаболической энергии. Это обуславливает их внутриклеточный рост. Принадлежит семейству Chlamydiaceae.
Источником инфекции является человек с острой или хронической формой урогенитальной хламидийной инфекции (как с клиническими проявлениями, так и с бессимптомным течением).
Основные пути передачи хламидийной инфекции:
Восприимчивость к урогенитальной хламидийной инфекции составляет от 60 до 100%, особенно высока она при иммунодефиците любого генеза.
Для урогенитального хламидиоза характерно длительное бессимптомное течение, что ведёт за собой широкое распространение инфекции. Так как носитель возбудителя хламидийной инфекции долгое время ничего не подозревает и передаёт его половым партнерам. Развитие выраженных клинических проявлений хламидийной инфекции чаще происходит уже на стадии осложнений. Это приводит к поздней диагностике и длительному, не всегда успешному лечению.
К возможным осложнениям хламидиоза при распространении за пределы урогенитального тракта относят:
Урогенитальный хламидиоз у женщин
Неосложненный урогенитальный хламидиоз у женщин протекает в форме слизисто-гнойного цервицита – воспаления шейки матки.
Симптомы хламидиоза у женщин: покалывание, зуд или жжение при мочеиспускании, боли внизу живота и паховой области, незначительные выделения из влагалища между менструациями или во время полового акта, небольшие кровотечения из половых путей, конъюнктивит. Возможно повышение температуры до субфебрильных значений. Симптомы в целом неспецифичны и для постановки диагноза необходимо лабораторное обследование (анализ на хламидию). Кроме того, до 75% случаев хламидиоза у женщин протекает бессимптомно и проявляется уже на стадии осложнений.
Примерно у 50% женщин, страдающих бесплодием, причинным фактором является хламидийная инфекция.
Анализ на хламидии при беременности: при хламидиозе у женщин на малых сроках беременности возможно формирование инфекционных эмбриопатий, которые проявляются врожденными пороками развития плода и первичной плацентарной недостаточностью. Это нередко заканчивается неразвивающейся беременностью, самопроизвольным выкидышем.
При беременности на более поздних сроках могут развиться вторичная плацентарная недостаточность, нарушение продукции амниотической жидкости (околоплодных вод), преждевременные роды.
Хламидийная инфекция у новорождённых
Хламидийная инфекция оказывает влияние на внутриутробное развитие плода, исход беременности и родов, течение послеродового периода. При прохождении инфицированных родовых путей у новорожденных может развиться хламидийная инфекция в форме конъюнктивита новорожденных (22-44% случаев). А также, через 2-12 недель после родов возможно поражение дыхательной системы вплоть до пневмонии, которая может давать осложнения и в более старшем возрасте (11-20%).
Урогенитальный хламидиоз у мужчин
В 25-30% случаев хламидиоз у мужчин протекает с невыраженными клиническими проявлениями и длительное время остаётся нераспознанным.
Неосложненная хламидийная инфекция протекает у мужчин чаще всего в форме уретрита – воспаления мочеиспускательного канала.
Симптомы хламидиоза у мужчин: зуд или жжение при мочеиспускании, боли в области мошонки, покраснение вокруг наружного отверстия мочеиспускательного канала, небольшие кровянистые выделения во время эякуляции или в конце мочеиспускания, конъюнктивит. Возможно повышение температуры до субфебрильных значений. Симптомы в целом неспецифичны и для постановки диагноза необходимо лабораторное обследование (анализ на хламидиоз).
Наиболее частым осложнением урогенитального хламидиоза у мужчин является эпидидимит (воспаление придатка яичка). Эпидидимит может привести к развитию бесплодия из-за повреждения ткани семенного канатика или подавления нормальной секреции яичка вследствие аутоиммунных процессов.
Лабораторная диагностика хламидийной инфекции
Раннее выявление хламидийной инфекции даёт возможность не только предотвратить её дальнейшее распространение и передачу потомству, но и значительно уменьшить риск осложнений, приводящих к нарушению репродуктивной функции.
Показания для сдачи анализа на хламидии:
ПЦР анализ на хламидии
В диагностике хламидиоза из всех существующих методов самым достоверным признан метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).*
Преимущества ПЦР диагностики при хламидиозе:
Для анализа на урогенитальный хламидиоз методом ПЦР можно сдать: соскоб из уретры, мочу, секрет предстательной железы у мужчин, соскоб из цервикального канала, влагалища у женщин.
Для диагностических мероприятий мы используем наборы реактивов ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, которые имеют сертификат соответствия ЕС и которые применяют не только у нас в стране, но и за рубежом.
Диагностика хламидийной инфекции в CMD
Для оптимального выбора исследований обращайтесь к своему лечащему врачу.
*Федеральные клинические рекомендации. Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. 2016 г.
Хламидия трахоматис IgM (п/кол) в Москве
Оценка количества антител IgМ к бактерии Хламидия трахоматис для выявления иммунного ответа на попадание в организм данного возбудителя.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ Хламидия трахоматис IgM (п/кол)?
Подробное описание исследования
Хламидии (Chlamydia trachomatis) служат возбудителями хламидиоза – распространенной инфекции, передающихся половым путем (ИППП). Эти бактерии имеют уникальный жизненный цикл с двумя формами развития: элементарные и сетчатые тельца. Первая форма участвует в распространении возбудителя, его попадании в клетки. Внутри клетки элементарные тельца превращаются в метаболически активные сетчатые тельца, обеспечивающие размножение возбудителя инфекции.
Обитая внутри клеток мочеполовой системы человека, хламидии используют их источники энергии и аминокислоты для размножения. В результате образуются новые элементарные тельца, которые затем могут инфицировать соседние клетки. C. trachomatis поражает эпителиальные клетки матки и влагалища, также обитает в слизистой оболочке уретры и прямой кишки как у мужчин, так и у женщин, и конъюнктивы.
Заражение хламидийной инфекцией наиболее часто осуществляется при половом акте в отсутствие барьерных средств контрацепции. Кроме того, передача указанной бактерии осуществляется от инфицированной матери новорожденному в процессе родов.
C. trachomatis может привести к воспалению органов малого таза, включая цервицит, уретрит, эпидидимит, простатит и венерическую лимфогранулему. Кроме того, данная бактерия способна поражать другие органы, вызывая конъюнктивит, перигепатит, фарингит, реактивный артрит и проктит.
При цервиците, то есть воспалении шейки матки, отмечаются слизисто-гнойные выделения из влагалища, межменструальные кровотечения. Распространение C. trachomatis в органы малого таза проявляется болями в нижних отделах живота, в том числе при половом акте. Иногда они сопровождаются лихорадкой, ознобом, болью в пояснице, нарушением мочеиспускания.
Уретрит, вызванный хламидиями, чаще всего встречается у мужчин. Его симптомами служат болезненное учащенное мочеиспускание, появление выделений из уретры прозрачного или серого цвета.
При хламидийном эпидидимите у мужчин, как правило, наблюдается односторонняя боль в яичке, отек придатка яичка и лихорадка. Наряду с этим часто воспаляется предстательная железа. Симптомы простатита включают нарушение мочеиспускания, боль в области таза, в том числе при эякуляции.
Перигепатит, или синдром Фитца-Хью-Кертиса, возникает, если хламидийная инфекция приводит к воспалению капсулы печени. Он является следствием поражения органов малого таза и проявляется болями в правом подреберье.
Проникновение хламидий в прямую кишку приводит к проктиту. Инфицированные люди могут жаловаться на боль, выделения слизи и кровотечение из этой области.
Реактивный артрит, то есть воспаление суставов, иногда наблюдается одновременно с хламидийным уретритом, а у каждого третьего отмечается триада симптомов: артрит, уретрит и увеит. Увеит и сопутствующий конъюнктивит – характерное для хламидиоза поражение глаз.
Редким осложнением заболевания служит венерическая лимфогранулема, проявляющаяся безболезненными язвами звездчатого вида на гениталиях, что сопровождается увеличением паховых лимфоузлов.
Хламидиоз нередко протекает в стертой форме или бессимптомно, однако длительное сохранение инфекции в организме служит одной из главных причин бесплодия. Ввиду этого необходима своевременная диагностика этого заболевания. Через 2-4 недели после заражения образуются антитела к хламидии IgM, после они заменяются на IgG, что служит признаком перенесенной инфекции или ее хронизации.
Хламидийная инфекция
Общая информация
Краткое описание
Одобрен
Объединенной комиссией по качеству медицинских услуг
Министерства здравоохранения Республики Казахстан
от «3» октября 2019 года
Протокол №74
МКБ-10 | |
Код | Название |
А56 | хламидийная инфекция |
А56.0 | хламидийные инфекции нижних отделов мочеполового тракта хламидийный: цервицит, цистит, уретрит, вульвовагинит |
А56.1 | хламидийные инфекции органов малого таза и других мочеполовых органов хламидийный(ые): эпидидимит (N51.1); воспалительные заболевания органов малого таза у женщин (N74.4); орхит (N51.1) |
А56.3 | хламидийная инфекция аноректальной области |
А56.4 | хламидийный фарингит |
А56.8 | хламидийные инфекции, передаваемые половым путем, другой локализации |
А74.0 | хламидийный конъюнктивит (Н13.1*) |
Дата разработки/пересмотра протокола: 2014 год (пересмотр 2019 г.)
Сокращения, используемые в протоколе:
ИППП | – | инфекции, передающиеся половым путем |
РКИ | – | рандомизированное контролируемое исследование |
ВИЧ | – | вирус иммунодефицита человека |
ВЗОМТ | – | воспалительные заболевания органов малого таза |
МСМ | – | мужчины с мужчинами |
МАНК | – | методы амплификации нуклеиновых кислот |
ПЦР | – | полимеразная цепная реакция |
ИФА | – | иммуноферментный анализ |
РНК | – | рибонуклеиновая кислота |
ДНК | – | дезоксирибонуклеиновая кислота |
УЗИ | – | ультразвуковое исследование |
АМП | – | антимикробный препарат |
МНН | – | международное непатентованное название |
в/м | – | Внутримышечно |
г | – | Грамм |
мл | – | Миллилитр |
мг | – | Миллиграмм |
Пользователи протокола: дерматовенеролог, гинеколог, уролог, врач общей практики.
Категория пациентов: взрослые, дети.
Шкала уровня доказательности:
А | Высококачественный мета-анализ, систематический обзор РКИ или крупное РКИ с очень низкой вероятностью (++) систематической ошибки результаты которых могут быть распространены на соответствующую популяцию. |
В | Высококачественный (++) систематический обзор когортных или исследований случай-контроль или Высококачественное (++) когортное или исследований случай-контроль с очень низким риском систематической ошибки или РКИ с невысоким (+) риском систематической ошибки, результаты которых могут быть распространены на соответствующую популяцию. |
С | Когортное или исследование случай-контроль или контролируемое исследование без рандомизации с невысоким риском систематической ошибки (+). Результаты, которых могут быть распространены на соответствующую популяцию или РКИ с очень низким или невысоким риском систематической ошибки (++ или +), результаты которых не могут быть непосредственно распространены на соответствующую популяцию. |
D | Описание серии случаев или неконтролируемое исследование или мнение экспертов. |
GPP | Наилучшая клиническая практика. |
Автоматизация клиники: быстро и недорого!
— Подключено 300 клиник из 4 стран
Автоматизация клиники: быстро и недорого!
Мне интересно! Свяжитесь со мной
Классификация
Клинические проявления урогенитального хламидиоза достаточно широки: от отсутствия специфических симптомов до развития манифестных форм заболевания.
С клинической точки зрения, урогенитальная хламидийная инфекция подразделяется на:
Диагностика
МЕТОДЫ, ПОДХОДЫ И ПРОЦЕДУРЫ ДИАГНОСТИКИ 1
Диагностические критерии 1:
Жалобы
Осложнения и остаточные явления, характерные как для женщин, так и мужчин.
К другим осложнениям, вызываемым C. trachomatis, относятся реактивный артрит (асептическое воспаление синовиальной оболочки сустава, связок или фасций) или перигепатит (синдром Фитца-Хью-Куртиса), перитонит, пневмония, хроническая тазовая боль (женщины).
Алгоритм диагностики неосложненной хламидийной инфекции
Дифференциальный диагноз
Дифференциальный диагноз и обоснование дополнительных исследований 1:
Симптомы хламидийной инфекции не являются специфичными, что диктует необходимость проведения лабораторных исследований для исключения других урогенитальных заболеваний, обусловленных патогенными (N. gonorrhoeae, T. vaginalis, M. genitalium) и условно-патогенными микроорганизмами (грибами рода Candida, генитальными микоплазмами и микроорганизмами, ассоциированными с бактериальным вагинозом) и вирусами (вирусом простого герпеса).
Дифференциальный диагноз хламидийного эпидидимоорхита проводят с водянкой яичка, инфекционным эпидидимоорхитом иной этиологии (туберкулезным, сифилитическим, гонококковым и др.), опухолью органов мошонки, с перекрутом ножки яичка и др.
Дифференциальный диагноз хламидийной инфекции верхних отделов половой системы женщин проводят с внематочной беременностью, эндометриозом, осложненной кистой яичника, заболеваниями органов брюшной полости (панкреатитом, холециститом и др.).
Основные клинико-лабораторные дифференциально-диагностические признаки С. trachomatis
Оцениваемые параметры | Хламидийная инфекция | Гонококковая инфекция | Микоплазменная инфекция | Урогенитальный трихомониаз | Бактериальный вагиноз | Урогенитальный кандидоз |
Выделения из половых путей | Слизистые мутные или слизисто- гнойные без запаха | Слизисто- гнойные или гнойные без запаха | Слизистые или слизисто- гнойные без запаха | Серо-желтого цвета, пенистые с неприятным запахом | Гомогенные беловато- серые, с неприятным запахом | Белые, творожистые, сливкообразные, с кисловатым запахом |
Гиперемия слизистых оболочек мочеполового тракта | Преимущественно слизи- стой оболочки шейки матки | Часто | Часто | Часто | Редко | Часто |
Зуд/жжение в области наружных половых органов | Редко | Часто | Редко | Часто | Редко | Часто |
Дизурия | Часто | Часто | Часто | Часто | Редко | Редко |
Диспареуния | Часто | Часто | Часто | Часто | Редко | Часто |
Рн вагинального экссудата | 3,8 — 4,5 | 3,8 — 4,5 | 3,8 — 4,5 | Может быть > 4,5 | >4,5 | 3,0 — 3,8 |
Микроскопия | Для верификации диагноза не проводится | Грамотрицательные диплококки с типичными морфологическими и тинкториальными свойствами | Оценка признаков воспаления (лейкоцитарная реакция, количество эпителиальных клеток) | Присутствие T. Vaginalis | Наличие «ключевых» клеток | Грибы Candida с преобладанием мицелия и почкующихся дрожжевых клеток |
Культуральное исследование | C. Trachomatis | N. Gonorrhoeae | — | T. Vaginalis | Преобладание G. Vаginаlis и облигатно- анаэробных видов | Рост колоний Candida в титре более 10 3 КОЕ/мл |
Молекулярно-биологические методы исследования | C. Trachomatis | N. Gonorrhoeae | Mycoplasma genitalium | T. Vaginalis | G. Vаginаlis | Candida albicans |
Лечение
Препараты (действующие вещества), применяющиеся при лечении
Азитромицин (Azithromycin) |
Джозамицин (Josamycin) |
Доксициклин (Doxycycline) |
Левофлоксацин (Levofloxacin) |
Офлоксацин (Ofloxacin) |
Лечение (амбулатория)
ТАКТИКА ЛЕЧЕНИЯ НА АМБУЛАТОРНОМ УРОВНЕ [1-3,5]
Одновременное лечение половых партнеров является обязательным.
Общие замечания по терапии
Выбор препаратов проводится с учетом анамнестических данных (аллергические реакции, индивидуальная непереносимость препаратов, наличие сопутствующих инфекций). Основными группами противохламидийных препаратов являются тетрациклины, макролиды и фторхинолоны.
Резистентность C. trachomatis к антибактериальным препаратам
До настоящего времени нет убедительных доказательств генетической и фенотипической лекарственной устойчивости C. trachomatis к основным антибактериальным средствам. Тем не менее, имеются опасения по поводу увеличения клинических неудач у пациентов с урогенитальным хламидиозом, получавших азитромицин, в особенности у пациентов, получавших его в однократной дозе 1,0 г. [1-3,6-10]. Некоторые причины данных неудач до сих пор не ясны.
Схемы лечения
Лечение хламидийных инфекций нижнего отдела мочеполовой системы аноректальной области, хламидийного фарингита, хламидийного конъюнктивита 2
Перечень основных лекарственных средств (имеющих 100% вероятность применения):
Лечение хламидийных инфекций верхних отделов мочеполовой системы, органов малого таза и других органов
Длительность курса терапии зависит от степени клинических проявлений воспалительных процессов мочеполовых органов, результатов лабораторных и инструментальных исследований. В зависимости от вышеперечисленных факторов длительность терапии может варьировать от 7 до 21 дней.
Перечень основных лекарственных средств (имеющих 100% вероятность применения):
Особые ситуации
Перечень дополнительных лекарственных средств (менее 100% вероятности применения): при осложненном течении заболеваний дополнительно рекомендуется назначение патогенетической терапии и физиотерапии.
Хирургическое вмешательство: нет.
Что такое днк chlamydia trachomatis
Современные представления о возбудителе
Серодиагностка
Современные представления о возбудителе
Хламидиозы — группа инфекционных заболеваний антропонозной и зоонозной природы, вызывающих широкий спектр разнообразной патологии более чем у полумиллиарда человек по всему миру (рис. 1).
По оценке ВОЗ, среди заболеваний, передающихся половым путем, урогенитальный хламидиоз занимает второе место по частоте после трихомонадных инфекций. Более 90 миллионов новых случаев инфицирования С. trachomatis происходит ежегодно в мире, а экономический ущерб составляет миллиарды долларов [11, 12, 13, 25]. Россия не является исключением. Ежегодно сотни тысяч новых случаев заболевания, вызванных данным видом хламидий, регистрируются в Российской Федерации, в то же время многие случаи остаются нераспознанными из-за неполноценной диагностики, а в ряде случаев — при использовании некачественных диагностикумов.
Chlamydia trachomatis — облигатные внутриклеточные грамотрицательные неподвижные бактерии — причина трахомы, болезней, передающихся половым путем, некоторых форм артритов, конъюктивитов и пневмоний у новорожденных. Кроме того, инфицирование С. trachomatis увеличивает риск проникновения ВИЧ-инфекции [4].
Рис. 1. Местная хламидийная колонизация слизистых.
Хламидии метаболически неактивны по своей способности синтезировать АТФ и для жизнедеятельности используют экзогенные источники энергии. Они обладают уникальным двустадийным (бифазным) циклом развития: инфекционная форма (элементарные тельца) путем эндоцитоза попадает в эукариотические клетки, в которых остается в виде цитоплазматических включений, трансформируясь в вегетативную форму (репродуктивные тельца) и размножаясь путем бинарного деления [10]. При благоприятных условиях репродуктивный цикл завершается в течение 48-72 часов.
Рис. 2. Цикл размножения хламидий.
При наличии неблагоприятных для хламидий факторов этот период развития может достаточно растянуться (рис. 2).
Таксономическая классификация хламидий основывается на ограниченных фенотипических, морфологических и генетических критериях. Она не учитывает современных достижений в области генетики хламидий, таких как полный сиквенс генома С. trachomatis, анализ рибосомального оперона и открытие облигатных внутриклеточных микроорганизмов, имеющих схожий с хламидиями цикл развития. Фундаментальные исследования в области систематики хламидий [1, 27, 28], позволили уточнить таксономическое положение ряда представителей порядка Chlamydiales и предложить новую классификацию хламидий.
Таблица 1. Современная классификация хламидий.
Из данных, представленных в таблице 1, видно, что были внесены поправки в семейство Chlamydiaceae, которое теперь включает два рода: собственно Chlamydia и новый род Chlamydophila; в последний перешли виды Chlamydia pecorum, Chlamydia pneumonia и Chlamydia psittaci. Род Chlamydia включает, кроме Chlamydia trachomatis, два новых вида: Chlamydia muridarum и Chlamydia suis. Chlamydia muridarum изолирован от мышей и золотистых хомячков [3,4], Chlamydia suis — от свиней [5].
Хламидийные виды продуцируют гликоген, который легко детектируется в человеческих сероварах С. trachomatis и в различных количествах — в С. muridarum и С. suis [6]. Штаммы, входящие в данный род, имеют различия в морфологии включений и в уровнях чувствительности к сульфадиазину.
Выраженный полиморфизм клинических проявлений значительно осложняет клиническую диагностику хламидиозов. Решающее значение в выявлении хламидийных инфекций принадлежит методам лабораторной диагностики, которые включают в себя и данные серологии (обнаружение различных классов антихламидийных антител). В то же время необходимо учитывать, что серологические методы имеют второстепенное значение в диагностике острой хламидийной инфекции из-за невысоких уровней антихламидийных антител. Но они успешно используются при тяжелых воспалительных заболеваниях урогенитальной сферы, в установлении диагноза персистирующей, бессимптомной, вялотекущей инфекции или хронических последствий заболеваний, вызванных С. trachomatis (осложнений, возникающих в результате восходящей инфекции), когда другие методы лабораторной диагностики неэффективны и не позволяют выявить антигены, или ДНК С. trachomatis, или живые микроорганизмы [12, 18]. В таких случаях серологический анализ дает исчерпывающий ответ, снижая возможность ложной интерпретации отрицательных результатов лабораторного анализа при прямом определении антигена или ДНК. Данный метод уменьшает необходимость использования инвазивных процедур, которые требуются для прямого детектирования антигена, ДНК/РНК возбудителя, и, соответственно, проблемы, связанные с техникой взятия образца (эффективности соскоба) и его транспортировки. Использование серологических методов исследования наиболее актуально при лабораторном обследовании больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза (ВЗОМТ), так как серодиагностика более часто выявляет наличие инфекционного процесса, вызванного С. trachomatis, по сравнению с ПЦР или культуральным методом при использовании образцов, полученных из шейки матки и уретры.
Наличие видоспецифических антихламидийных антител пятикратно повышает риск возникновения внематочной беременности [32]. Исследования наличия МОМР-белка С. trachomatis в тканевых образцах маточных труб у бесплодных женщин с гистологически подтвержденным хроническим сальпингитом и/или трубной непроходимостью показали, что уровень видоспецифических антител класса G к С. trachomatis значительно выше у пациентов, у которых специфический антиген был обнаружен, чем в случаях, когда он не выявлялся. Распространение и уровни антител класса А отмечены на более высоких значениях при ВЗОМТ, чем у пациентов с бесплодием, обусловленным трубной непроходимостью. Это может свидетельствовать о более остром течении хламидийной инфекции у пациентов с ВЗОМТ. Кроме того, отмечены более высокие уровни видоспецифических антител класса G у пациентов с бесплодием, вызванным трубной непроходимостью, чем у пациентов с другим генезом бесплодия [21,34], а также у больных реактивными артритами [15]. Антитела к возбудителю определяются более чем у 50% женщин с обтурацией маточных труб. Необходимо учитывать, что более 50% случаев воспаления придатков вызвано С. trachomatis [26].
Все это свидетельствует о предпочтительности проведения серологического исследования у больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза [16,20]. Видоспецифическая диагностика антител к С. trachomatis применяется для исключения хронической формы этой инфекции у женщин с ВЗОМТ и бесплодием. Не менее важна она для установления причин реактивного артрита [30]. Определение IgG к МОМР-белку в синовиальной жидкости успешно используется для диагностики реактивного артрита, вызванного С. trachomatis [15].
Современным направлением в лабораторной диагностике инфекций, вызванных С. trachomatis, становится комплексный подход при использовании комбинации различных диагностических тестов для скрининга и подтверждения. Серологическое исследование посредством определения видоспецифических антител к С. trachomatis является достаточно эффективным методом диагностики, особенно при инфекциях верхних отделов урогенитального тракта. Метод позволяет охарактеризовать присутствие инфекции, ее стадию и назначить соответствующее лечение.
Характеристика гуморального ответа
Иммунологический ответ при хламидиозах еще недостаточно изучен. Известно, что развитие хламидийной инфекции активирует защитные механизмы организма человека: индукция секреторного IgA, цитотоксическое действие Т-клеток и гуморальный ответ путем выработки различных классов антител. Последовательная динамика появления различных классов антител — М, A, G — позволяет поставить точный серологический диагноз хламидийной инфекции.
Наработка антител к антигенам хламидий происходит на стадии элементарных телец, когда хламидийные клетки находятся в межклеточном пространстве и доступны для контакта с иммунокомпетентными клетками организма. Хламидии поглощаются периферическими моноцитами, распространяются и оседают в различных органах и тканях организма человека, сохраняясь там в течение длительного периода времени, что, как правило, приводит к развитию восходящей персистирующей формы инфекции, которая обуславливает хроническое течение болезни. При этом время от времени происходит высвобождение антигенов хламидий из клеток, что приводит к индуцированию гуморального ответа. Известно, что возбудитель или его антигенные или нуклеиновые компоненты могут не выявляться в воротах первоначальной инфекции. Заболевание приобретает системный характер (рис. 3).
Рис. 3. Системное распределение возбудителей.
Сами хламидии — слабые иммуногены, поэтому титры антител при хламидиозах относительно невысоки. О сроках появления антител к основным белкам хламидий известно пока очень мало. В промежутке между 1-й и 3-й неделями после проявления первых симптомов болезни последовательно возникают родоспецифические антитела М, A, G, а в ряде случаев их удается определить в этот период одновременно.
IgM антитела в сыворотке пациентов являются ранним маркером инфекции, появляются первыми при иммунологическом ответе макроорганизма, инфицированного хламидиями. Антитела IgM определяются уже через 5 дней после начала заболевания. Наличие специфических IgM свидетельствует о развитии острой фазы хламидийной инфекции. Основное количество IgM сосредоточено в сосудистом русле. Период полураспада составляет 5 дней. Они нарабатываются против специфического хламидийного липополисахарида как наиболее сильного антигенного раздражителя иммунной системы, обладающего родоспецифическими функциями и стимулирующего антителогенез уже на ранней стадии инфицирования организма человека. Пик IgM приходится на 1-2-ю неделю. Затем происходит снижение титра антител. Как правило, IgM полностью исчезают через 2-3 месяца независимо от проведенного лечения. Эти антитела присутствуют только при острой фазе заболевания и не определяются при реинфекции. IgM оказывают стимулирующее влияние на синтез IgG. Антитела данного класса в ряде случаев могут не выявляться у подростков и взрослых при острой реинфекции (предыдущее инфицирование С. trachomatis или другими видами хламидий (С. pneumonia)). Выявление IgM к С. trachomatis является одним из основных серологических тестов для диагностики хламидийных пневмоний у новорожденных детей, а также у пациентов с LGV (венерической лимфогранулемой).
IgA существуют в сывороточной и секреторной формах. Первая защитная реакция организма на инфекцию состоит в индукции секреторного IgA в местах проникновения инфекции. Вначале этот класс антител можно детектировать в семинальной и вагинальной жидкостях [23], в то же время отсутствует корреляция с содержанием сывороточного IgA [29]. В сыворотке антитела появляются через 10-14 дней после начала заболевания, обычно параллельно появлению G-антител, только на более низком уровне титров, и свидетельствуют о прогрессировании заболевания. Уровень IgA-антител обычно снижается к 2-4-му месяцу в результате успешного лечения. При реинфекциях их уровень вновь возрастает. Если уровень IgA не падает после проведенного лечения, то это указывает на неэффективность лечения и формирование хронической формы инфекции. Таким образом, в диагностике хламидийной инфекции очень важно определение IgA-антител, так как они являются маркером как острой формы, так и манифестации при хронической форме инфекции. Наличие IgA свидетельствует об активации хламидийной инфекции. В течение короткого периода могут быть параллельно представлены IgM и IgA антитела. Определение специфических IgA более информативно в качестве маркера активной стадии хламидийной инфекции или в мониторинге эффективности лечения, так как эти антитела короткоживущие (5-8 дней) и имеют небольшой период полураспада. В это же время или с небольшой задержкой могут быть определены антитела класса IgG.
IgG — доминирующий класс иммуноглобулинов в сыворотке крови, составляющий до 90% всех антител. Около 48% его количества находится вне кровеносного русла, проходит через плацентарный барьер. Период полураспада — 23 дня. Аффинитет IgG к антигенным детерминантам хламидий повышается по мере развития иммунного ответа. IgG-антитела определяются через 15-20 дней после начала заболевания. Их наличие отражает более общую картину позитивного иммунного ответа в случаях текущей, хронической или перенесенной инфекции. В последнем случае IgG могут определяться на низком уровне в течение многих лет. В случае если происходит реинфекция или реактивация, наблюдается заметное увеличение уровня IgG (бустер-эффект), который у нелеченных пациентов сохраняется на неизменном уровне. Высокие уровни антихламидийных IgG диагностически важны при хронических или системных инфекциях: сальпингиты, механическая инфертильность, перигепатиты, эпидимиты, синдром Рейтера и пневмонии.
Хроническое течение хламидийной инфекции характеризуется наличием в крови пациентов IgA и IgG, уровни которых меняются незначительно в противоположность острой инфекции. Иногда при таком течении инфекции в течение 1-2 недель могут регистрироваться единичные IgA при недетектируемом уровне IgG. Обнаружение невысоких постоянных уровней lgA-антител в течение длительного периода времени может свидетельствовать о персистенции возбудителя при полном отсутствии симптоматики у пациентов. При лечении осложнений, вызванных восходящей хламидийной инфекцией, определение IgA и IgG может обеспечивать контроль излеченности пациентов [32]. Выявление 2-3-кратного снижения уровня А и/или G антител при исследовании в парных сыворотках может свидетельствовать об успешно проведенной терапии. Использование в серодиагностике парных сывороток, полученных на разных стадиях инфекции, может быть полезным, так как 2-4-кратная сероконверсия (увеличение титра антител во второй сыворотке по сравнению с первоначальной), свидетельствует об активной инфекции.
Динамика распределения видоспецифических антител к С. trachomatis в различных группах населения представлена в таблице 2.
Таблица 2. Мониторинг и распределение IgG и IgA к С. trachomatis в различных группах населения
Иммуноферментный анализ в серодиагностике хламидиозов
При серодиагностике хламидиозов используют следующие методы: реакция связывания комплемента (РСК), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) или микроиммунофлюоресценции (MIF-test), непрямой иммунопероксидазный анализ (IРА). Описание данных методов приведено в многочисленных зарубежных и отечественных публикациях.
Для серодиагностики хламидийных инфекций используют коммерческие ИФА-тест-системы, позволяющие выявлять родоспецифические или видоспецифические антитела различных классов. Иммуноферментные тест-системы, предназначенные для выявления родоспецифических антител, позволяют обнаруживать антитела классов IgM, IgA, IgG ко всем хламидиям. Тест-системы, сконструированные на основе видоспецифических белков или эпитопов С. trachomatis, позволяют определять видоспецифические антитела. В качестве антигенов для иммобилизации иммунологических планшетов при постановке ИФА на выявление родоспецифических антител к хламидиям используют очищенные лизаты клеток хламидий, наиболее часто из С. psittaci, или более высокоспецифичный рекомбинантный фрагмент хламидийного липополисахарида, не дающий перекреста с липосахаридами других грамотрицательных бактерий. В связи с этим тест-системы, основанные на использовании родоспецифического антигена хламидий, не дают информацию о том, каким видом хламидий вызвана инфекция, т. к. между различными видами могут наблюдаться перекрестные реакции. Известно, что более 70% населения имеют антитела к хламидиям, при этом большая доля (до 60-80%) людей имеют антитела к С. pneumonia (без клинической симптоматики), тогда как средние значения содержания антител к С. trachomatis составляют в популяции около 21%, сильно варьируя в различных группах населения [17].
В связи с этим при уточнении диагноза необходимо проводить межвидовую дифференцировку между С. trachomatis и С. pneumonia. Для дифференцировки между С. pneumonia и С. trachomatis требуются тесты, направленные на определение видоспецифических антител к тому или иному виду хламидий. При производстве видоспецифических тест-систем в качестве антигенов используют синтетические иммунодоминантные пептиды, соответствующие различным серотипам, которые не имеют гомологии с другими видами хламидий; рекомбинантные белки или очищенные элементарные тельца, специфичные для определенного вида хламидий.
Современные зарубежные тест-системы для определения видоспецифических антител к С. trachomatis разработаны на основе синтетических пептидов, являющихся зеркальным отражением видоспецифических иммунодоминантных эпитопов МОМР-белка, что исключает возможность перекреста с другими видами хламидий (рис. 4).
Рис. 4. Структура клеточной стенки хламидии.
Использование синтетических пептидов иммунодоминантных эпитопов МОМР-белка (основной белок наружной мембраны) в качестве антигенов в ИФА позволило существенно повысить чувствительность и специфичность разработанных коммерческих ИФА-тест-систем (фирм “Лаб-системc”, Финляндия; “Savyon Diagnostics Ltd”, Израиль; “Меdac”, Германия; “Meiji Milk Products Co., Ltd”, Япония) [18, 19]. При исследовании сывороток в данных тест-системах отсутствует перекрест с антителам и к С. pneumonia. Это особенно важно, т. к. с возрастом у абсолютного большинства людей выявляются антитела к С. pneumonia [36] в различных титрах, при этом отсутствуют клинические проявления. Использование иммуноферментных методов диагностики имеет большую ценность при установлении окончательного диагноза. Для выявления антител к С. trachomatis необходимо проводить определение IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA подтверждение осуществляется определением IgM. Определение только IgM недостаточно, так как отсутствие этого класса антител еще не говорит об отсутствии заболевания. Острой формы заболевания нет, но может быть хроническая.
Необходимо отметить, что ведущие зарубежные производители иммуноферментных тест-систем для серодиагностики хламидий не выпускают видоспецифические иммуноферментные тест-системы для выявления антител класса М к C.trachomtis. Работа по созданию таких ИФА-тест-систем проводится [29], но наталкивается на ряд проблем. Циркулирующий ревматоидный фактор (IgM анти IgG) обуславливает ложноположительные результаты. Кроме того, присутствие в сыворотках чрезмерных количеств специфических IgG может приводить к конкуренции с IgM за определенные антигенные эпитопы и быть причиной ложнонегативных результатов. Антитела данного класса в ряде случаев могут не выявляться у подростков и взрослых при острой инфекции из-за предыдущего инфицирования С. trachomatis или другими видами хламидий (С. pneumonia).
В то же время выявление IgM к С. trachomatis является одним из основных серологических тестов для диагностики хламидийных пневмоний у новорожденных детей, а также у пациентов с LGV (венерической лимфогранулемой). Наиболее часто в таких случаях используют флуоресцентный метод определения видоспецифических антител данного класса или родоспецифический ELISA-тестдля обнаружения IgM.
Иммуноферментная тест-система для выявления видоспецифических
IgG к С. trachomatis “Хлами-IgG-ДС-Тг”
ЗАО “Медико-биологический союз” (МБС) совместно с НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ “Вектор”, 000 “Агробиомед” впервые в России разработали коммерческую тест-систему для выявления видоспецифических иммуноглобулинов G к С. trachomatis в сыворотке крови человека методом ИФА.
В процессе разработки тест-системы была проведена сравнительная оценка различных антигенов С. trachomatis отечественного производства. Показана перспективность применения в качестве сенсибилизирующего антигена для иммунологических планшетов видоспецифического рекомбинантного белка С. trachomatis (С-концевой фрагмент МОМР-белка С. trachomatis). Использование высокоочищенного видоспецифического рекомбинантного антигена позволило создать тест-систему “Хлами-IgG-ДС-Тг”, обладающую высокой чувствительностью и специфичностью. Показано отсутствие перекрестных реакций с антителами к С. psittaci и С. pneumonia.
Тест-система была аттестована в контролированном шифрованном клиническом опыте, проведенном сотрудниками ГИСК им. Л. А. Тарасевича на 180 сыворотках, полученных от больных с различными поражениями внутренних органов и мочеполовой системы хламидийной этиологии, от больных людей с различными поражениями внутренних органов и мочеполовой системы нехламидийной этиологии (пневмонии, бронхиты, ОРЗ, артриты, гепатиты В и С, нефриты, урогенитальные инфекции) и от здоровых людей без клинических жалоб.
Таблица 3. Результаты испытаний чувствительности и специфичности иммуноферментной тест-системы “Хлами-IgG-ДС-Tr” в сравнении с референс-тест-системой.